[发明专利]富含三萜类化合物糖肽的生理功能调节液的制备方法

权利要求书

1、富含三萜类化合物糖肽生理功能调节液的制备方法，其特征在于包含如下步骤：

A、制备云芝发酵液：分以下五步进行：

a、制备斜面培养云芝菌种：将植物蛋白胨、酵母膏、葡萄糖及琼脂粉按照重量比植物蛋白胨∶酵母膏∶葡萄糖∶琼脂粉∶水＝10∶4∶30∶20∶1000的比例，配制成斜面培养基，装入试管，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至27℃，制成30°-80°斜面，按照重量比云芝菌种∶斜面培养基＝1∶100的比例，将云芝菌种接入斜面培养基中，在27℃温度下静止培养5天，得到斜面培养云芝菌种；

云芝菌种采用中国微生物菌种保藏中心的保藏号为CMGCC NO.5.161杂色云芝菌株。经过筛选，得到富含三萜类化合物云芝糖肽的菌株作为菌种；

b、制备摇瓶培养云芝菌种：将植物蛋白胨、酵母膏、葡萄糖及磷酸二氢钾按照重量比植物蛋白胨∶酵母膏∶葡萄糖∶磷酸二氢钾∶水＝10∶1∶30∶0.6∶1000的比例配置成摇瓶培养基，装入摇瓶，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至27℃，按照重量比斜面培养云芝菌种：摇瓶培养基＝10∶100的比例，将步骤Aa所得的斜面培养云芝菌种接入摇瓶培养基中，在温度为27℃转速为80-120转/分的摇床上培养4天，得到摇瓶培养云芝菌种；

c、制备一级种子培养云芝菌种：按照重量比豆粕∶葡萄糖∶磷酸二氢钾∶水＝20∶20∶0.6∶1000的比例配置成一级种子培养基，装入种子罐中，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至27℃，按照重量比摇瓶培养云芝菌种：一级种子培养基＝10∶100的比例，将步骤Ab所得的摇瓶培养云芝菌种接入一级种子培养基中，在温度为27℃、通气条件下，培养3天，得到一级种子培养云芝菌种；

d、制备二级种子培养云芝菌种：按照重量比豆粕∶葡萄糖∶磷酸二氢钾∶水＝20∶20∶0.6∶1000的比例，配置成二级种子培养基，装入种子罐中，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至27℃，按照重量比一级种子培养云芝菌种：二级种子培养基＝5∶100的比例，将步骤Ac所得的一级种子培养云芝菌种接入二级种子培养基中，在温度为27℃，通气条件下，培养3天，得到二级种子培养云芝菌种；

e、制备云芝深层发酵液：按照重量比豆粕∶葡萄糖∶磷酸二氢钾∶水＝20∶20∶0.6∶1000的比例，配置成云芝深层发酵液培养基，装入发酵罐中，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至27℃，按照重量比二级种子培养云芝菌种：云芝深层发酵液培养基＝5∶100的比例，将步骤Ad所得的二级种子培养云芝菌种接入云芝深层发酵液培养基中，在温度27℃，通气条件下，培养3天，得到含三萜类化合物云芝糖肽的云芝深层发酵液；

B、制备去除菌丝体的云芝深层发酵液滤液

将步骤Ae所得云芝深层发酵液以40-80目筛过滤，去除菌丝体，得到云芝深层发酵液滤液；

C、制备云芝活菌发酵液，分以下5步进行

a、制备活菌发酵液斜面菌种：按照重量比植物蛋白胨∶酵母膏∶牛肉膏∶磷酸氢二钾∶葡萄糖∶琼脂粉∶水＝10∶5∶10∶0.5∶20∶20∶1000的比例，配制活菌发酵液斜面培养基，装入试管，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至37℃，制成斜角为30°-80°的斜面，按照重量比活菌：活菌发酵液斜面培养基＝1∶100的比例，将活菌菌种接入活菌发酵液斜面培养基中，在温度37℃，静止培养24-72小时，得到活菌发酵液斜面菌种；

活菌采用中国微生物保藏菌种中心的CMGCC NO.1.1878嗜酸乳杆菌菌株，经过筛选，得到可利用云芝深层发酵液滤液进行发酵的菌株作为菌种；

b、制备活菌发酵液摇瓶菌种：按照重量比植物蛋白胨∶酵母膏∶牛肉膏∶磷酸氢二钾∶葡萄糖∶水＝10∶2∶5∶0.5∶20∶1000的比例配制活菌发酵液摇瓶培养基，装入摇瓶，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至37℃，按照重量比活菌发酵液斜面菌种：云芝活菌发酵液摇瓶培养基＝10∶100的比例，将步骤Ca所得的活菌发酵液斜面菌种接入活菌发酵液摇瓶培养基中，在温度为37C，在转速为80-120转/分钟的摇床上培养24-72小时得到活菌发酵液摇瓶菌种；

c、制备活菌发酵液一级菌种：按照重量比植物蛋白胨∶酵母膏∶磷酸氢二钾∶葡萄糖∶水＝10∶2∶0.5∶20∶1000的比例配制活菌发酵液一级培养基，装入种子罐，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至37℃，按照重量比活菌发酵液摇瓶菌种：活菌发酵液一级培养基＝10∶100的比例，将步骤Cb所得的活菌发酵液摇瓶菌种接入活菌发酵液一级培养基中，在温度为37℃，静止培养24-72小时，得到活菌发酵液一级菌种；

d、制备活菌发酵液二级菌种：将步骤B所得的云芝深层发酵液滤液加温至121℃灭菌30分钟，冷却至37℃，按照重量比活菌发酵液一级菌种：云芝深层发酵液滤液＝5∶100的比例，将步骤Cc所得的活菌发酵液一级菌种接入云芝深层发酵液滤液中，在温度为37℃，静止培养24-72小时，得到活菌发酵液二级菌种；

e、制备深层培养云芝活菌发酵液：将步骤B所得的云芝深层发酵液滤液，装入发酵罐，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至37℃，按照重量比活菌发酵液二级菌种：云芝深层发酵液滤液＝5∶100比例，将步骤Cd所得的活菌发酵液二级菌种接入云芝深层发酵液滤液中，在温度为37℃，静止培养48-96小时，得到深层培养云芝活菌发酵液；

D、加入保护剂：在测得深层培养云芝活菌发酵液中的活菌数大于或等于10个条件下，加入保护剂海藻糖，保护剂的重量为深层培养云芝活菌发酵液的重量的1-5％，得到富含三萜类化合物云芝糖肽的生理功能调节液成品。