[发明专利]富含三萜类化合物糖肽的生理功能调节液的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备生理功能调节液的制备方法。

背景技术

已有技术云芝是一种富含三萜类化合物云芝糖肽的名贵药材，能够促进蛋白质和核酸的合成，具有很强的免疫及生理调节功能，能够保肝、抗病毒、抗肿瘤。已有技术生理功能调节液，是对人体及动物机体有益的生理功能调节剂。已有技术的不足之处是其中所含三萜类化合物糖肽少，效果不够理想。

发明内容

所要解决的技术问题是提供一种富含三萜类化合物云芝糖肽生理功能调节液制备方法。

解决其技术问题的技术方案，包含如下5个步骤：

A、制备云芝发酵液：分以下五步进行

a、制备斜面培养云芝菌种：将植物蛋白胨、酵母膏、葡萄糖及琼脂粉按照重量比植物蛋白胨∶酵母膏∶葡萄糖∶琼脂粉∶水＝10∶4∶30∶20∶1000的比例，配制成斜面培养基，装入试管，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至27℃，制成30°-80°斜面，按照重量比云芝菌种∶斜面培养基＝1∶100的比例，将云芝菌种接入斜面培养基中，在27℃温度下静止培养5天，得到斜面培养云芝菌种；

云芝菌种采用中国微生物菌种保藏中心的保藏号为CMGCC NO.5.161杂色云芝菌株。经过筛选，得到富含三萜类化合物云芝糖肽的菌株作为菌种。

b、制备摇瓶培养云芝菌种：将植物蛋白胨、酵母膏、葡萄糖及磷酸二氢钾按照重量比植物蛋白胨∶酵母膏∶葡萄糖∶磷酸二氢钾∶水＝10∶1∶30∶0.6∶1000的比例配置成摇瓶培养基，装入摇瓶，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至27℃，按照重量比斜面培养云芝菌种∶摇瓶培养基＝10∶100的比例，将步骤Aa所得的斜面培养云芝菌种接入摇瓶培养基中，在温度为27℃转速为80-120转/分的摇床上培养4天，得到摇瓶培养云芝菌种；

c、制备一级种子培养云芝菌种：按照重量比豆粕∶葡萄糖∶磷酸二氢钾∶水＝20∶20∶0.6∶1000的比例配置成一级种子培养基，装入种子罐中，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至27℃，按照重量比摇瓶培养云芝菌种∶一级种子培养基＝10∶100的比例，将步骤Ab所得的摇瓶培养云芝菌种接入一级种子培养基中，在温度为27℃、通气条件下，培养3天，得到一级种子培养云芝菌种；

d、制备二级种子培养云芝菌种：按照重量比豆粕∶葡萄糖∶磷酸二氢钾∶水＝20∶20∶0.6∶1000的比例，配置成二级种子培养基，装入种子罐中，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至27℃，按照重量比一级种子培养云芝菌种∶二级种子培养基＝5∶100的比例，将步骤Ac所得的一级种子培养云芝菌种接入二级种子培养基中，在温度为27℃，通气条件下，培养3天，得到二级种子培养云芝菌种；

e、制备云芝深层发酵液：按照重量比豆粕∶葡萄糖∶磷酸二氢钾∶水＝20∶20∶0.6∶1000的比例配置成云芝深层发酵液培养基，装入发酵罐中，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至27℃，按照重量比二级种子培养云芝菌种∶云芝深层发酵液培养基＝5∶100的比例，将步骤Ad所得的二级种子培养云芝菌种接入云芝深层发酵液培养基中，在温度27℃，通气条件下，培养3天，得到含三萜类化合物云芝糖肽的云芝深层发酵液；

B、制备去除菌丝体的云芝深层发酵液滤液

将步骤Ae所得云芝深层发酵液以40-80目筛过滤去除菌丝体，得云芝深层发酵液滤液；

C、制备云芝活菌发酵液，分以下5步进行

a、制备活菌发酵液斜面菌种：按照重量比植物蛋白胨∶酵母膏∶牛肉膏∶磷酸氢二钾∶葡萄糖∶琼脂粉∶水＝10∶5∶10∶0.5∶20∶20∶1000的比例配制活菌发酵液斜面培养基，装入试管，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至37℃，制成斜角为30°-80°的斜面，按照重量比活菌∶活菌发酵液斜面培养基＝1∶100的比例，将活菌菌种接入活菌发酵液斜面培养基中，在温度37℃，静止培养24-72小时，得到活菌发酵液斜面菌种；

活菌采用中国微生物保藏菌种中心的CMGCC NO.1.1878嗜酸乳杆菌菌株，经筛选，得到可利用云芝深层发酵液滤液进行发酵的菌株作为菌种，还可使用乳酸菌，酵母菌、芽胞杆菌；