[发明专利]重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的高效稳定表达和纯化及其应用

权利要求书

1、重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的高效稳定表达和纯化的方法，包括如下步骤：

1)、重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的高效稳定表达：以全长Jerdonitin基因为模板，设计正向引物和反向引物，进行PCR扩增目的基因；将此目的基因与克隆载体经限制性内切酶酶切；然后连接目的基因和克隆载体，获得含目的基因Jerdonitin的重组质粒；重组质粒转入大肠杆菌进行扩增；大量抽提重组质粒；重组质粒经过酶切线性化后，将此重组质粒电转入到酵母表达菌株中，建立能稳定表达Jerdonitin的工程菌株；在甲醇诱导下表达Jerdonitin；

2)、重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的纯化方法：根据表达的蛋白的性质，选择用阴离子琼脂糖柱阶段性洗脱初步捕获蛋白，再用凝胶层析柱和阴离子交换柱纯化，可获得纯度较高的蛋白。

2、按权利要求1所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增Jerdonitin基因所用的引物为：

正向引物，5’-CGGAATTCGAGCTCTATAATCTTGGAATCTG-3’

反向引物，5’-GCTCTAGATAGGCATGGAAGGGATTTC-3’

所述的克隆载体为pPICZaC；所述用于酶切目的基因与克隆载体的限制性内切酶为EcoRI和XbaI；所述的重组质粒线性化是用Sac I酶切含有Jerdonitin重组质粒；所述的酵母表达菌株为X-33。

3、按权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的阴离子琼脂糖柱为DEAE阴离子琼脂糖柱；所述的凝胶层析柱为凝胶层析柱superdex75 HR10/30；所述的阴离子交换柱为阴离子交换柱Mono Q HR 5/5。

4、重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin在制备抗血栓药物的应用。

5、重组蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin在制备抗肿瘤药物的应用。