[发明专利]微菌落分子信标培养结核菌诊断试剂盒及制备方法和应用

权利要求书

1.用于制备微菌落分子信标培养结核杆菌的诊断试剂盒以及用于PCR扩增结核杆菌选定的 靶序列的两对引物和两条分子信标探针的组合物，

所述两对引物为：

Tb1f：CAAggAgTTCTTCggCACC   Tb1r：AgCCgATCAgACCgATgTT，

TB2f：gCCTACgTggCCTTTgTC    TB2r：ggTCCAgATggCTTgCTC；

所述两条分子信标探针为：

Tb1probe：fam+CAgCgCgTgAgCgTgCCgggCTgCgCTg+dabcyl

Tb2probe：hex+CAgCgACgCCTACgCTCgCAggATCCTCgCTg+dabcyl其序列是其 环状部分与靶序列特异性互补，茎部为与靶序列无关的互补的寡核苷酸。

2.一种用于微菌落分子信标培养结核杆菌的诊断试剂盒，包括：权利要求1所述的两对引物 和两条分子信标探针的组合，罗琴氏培养基，选择性培养基，DNA提取液，醋酸纤维素膜， 阳性对照液和阴性对照液，载玻片，95％乙醇，按无水乙醇：苯酚=1：10配成的酒精苯酚， 在核酸扩增和杂交的反应管内装0.02-0.04ml的核酸扩增混合液，

所述两对引物：

Tb1f：CAAggAgTTCTTCggCACC   Tb1r：AgCCgATCAgACCgATgTT

TB2f：gCCTACgTggCCTTTgTC    TB2r：ggTCCAgATggCTTgCTC；

所述两条分子信标探针：

Tb1probe：fam+CAgCgCgTgAgCgTgCCgggCTgCgCTg+dabcyl

Tb2probe：hex+CAgCgACgCCTACgCTCgCAggATCCTCgCTg+dabcyl

所述DNA提取液为50mmol／L NaOH、10mmol／L pH8.0的Tris.HCl、1％ TritonX-100、1％NP-40和0.5mmol／L pH8.0的EDTA。