[发明专利]一种基因稀有突变的定量检测方法

权利要求书

1.一种基因稀有突变的定量检测方法，其特征在于包括以下步骤：

1)根据需要定量检测的基因稀有突变，设计并制备相应的引物序列，引物的3’末端为 突变位点特异核苷酸，除了最后一位核苷酸，其余序列均可通过商业合成，最后一位核苷酸 为修饰核苷酸，使引物在常规PCR反应中无法延伸，修饰核苷酸添加至引物末端，所述修 饰核苷酸选用ddNTP封闭末端，修饰核苷酸由末端转移酶添加至引物末端；

2)在含有特定DNA聚合酶和焦磷酸的反应体系中，采用步骤1)设计并制备的引物对 待定量检测的基因稀有突变进行扩增，并利用实时荧光PCR仪进行定量检测，所述利用实 时荧光PCR仪进行定量检测的方法采用染料嵌入法、双链引物法、单链荧光自淬灭引物法 或荧光探针法，并且包括单重荧光定量与多重荧光定量；

3)通过分析实时荧光PCR仪所记录的扩增曲线，即可获得基因稀有突变的定量检测信 息。

2.如权利要求1所述的一种基因稀有突变的定量检测方法，其特征在于所述采用染料 嵌入法在反应过程中掺入核酸染料，此类核酸嵌入染料有SYBR Green I或Eva Green。

3.如权利要求1所述的一种基因稀有突变的定量检测方法，其特征在于所述采用双链 引物法是指采用荧光标记的双链引物指示扩增。

4.如权利要求1所述的一种基因稀有突变的定量检测方法，其特征在于所述单链荧光 自淬灭引物法是指采用单链荧光自淬灭引物的荧光标记指示扩增。

5.如权利要求1所述的一种基因稀有突变的定量检测方法，其特征在于所述的探针为 用于实时PCR检测的核酸探针。

6.如权利要求1所述的一种基因稀有突变的定量检测方法，其特征在于所述用于实时 PCR检测的核酸探针为TaqMan探针，分子信标，改良分子信标，双链荧光置换探针或 LightCycler探针。