[发明专利]重组人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)融合蛋白的制备方法无效
| 申请号： | 200810072372.X | 申请日： | 2008-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN101429519A | 公开（公告）日： | 2009-05-13 |
| 发明（设计）人： | 俞昌喜;廖联明;杨渐;许盈 | 申请（专利权）人： | 福建医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;C07K19/00;C07K14/65;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 350004*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 胰岛素 生长因子 igf 融合 蛋白 制备 方法 | ||
1、一种重组人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)融合蛋白的制备方法，其特征在于采用基因菌发酵法生产：a.重组人IGF-1-1融合蛋白基因设计和合成；b.构建重组人IGF-1-1融合蛋白表达载体；c.用表达载体转化宿主构建基因工程菌；d.用基因工程菌发酵重组人IGF-1融合蛋白。
2、根据权利要求1所述的一种重组人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)融合蛋白的制备方法，其特征在于：所述的基因的结构特点是组成融合蛋白的两个蛋白分别是硫氧还蛋白和IGF-1，两个蛋白之间引入了一个二肽键Asn-Gly；含6组氨酸系列的纯化工艺。
3、根据权利要求1所述的基因发酵重组人IGF-1-1融合蛋白的工艺流程如下：挑选单菌落基因工程菌，进行放大培养，诱导表达，收集菌液进行细胞破碎，分离出包涵体，破坏包涵体，释放出融合蛋白，过NI2+-金属金属螯合柱获得融合蛋白，融合蛋白在羟胺溶液中裂解，释放重组人IGF-1，分离纯化IGF-1，再脱盐，冷冻干燥样品，质检得最终样品。
4、根据权利要求1所述的一种重组人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)融合蛋白的制备方法，其特征在于：所述的载体为商品化的pET32a(+)，及其替代品。
5、根据权利要求1所述的一种重组人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)融合蛋白的制备方法，其特征在于：所述的宿主细胞为DH5α及其替代品。
6、根据权利要求1所述的一种重组人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)融合蛋白的制备方法，其特征在于：所述的融合蛋白中是采用优化的裂解条件，羟胺浓度为2—3M，反应的温度为40—45℃，采用LiOH控制pH8.5-9.5，反应时间为5—10小时。
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