[发明专利]一种蜂蜜中溶菌酶的检测方法

权利要求书

1.一种蜂蜜中溶菌酶的检测方法，其特征包括如下步骤：

A、建立溶菌酶标准曲线

以溶菌酶标准试剂为标准品，通过紫外分光分析在290nm下测定其吸光值，建立溶菌酶标准曲线：

A-1、称取溶菌酶标准品125mg溶于250mL 0.85％的NaCl溶液中，配成500ug/mL的使用液，分别取使用液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL于10mL容量瓶中，用0.85％的NaCl定容至刻度，配制成系列应用液；

A-2、扫描波长，取使用液于紫外可见分光光度计220nm-400nm进行光谱扫描，扫描结果为溶菌酶在290nm有最大吸收峰；

A-3、标准曲线制备

将系列应用液分别在紫外可见分光光度计290nm下测定，做标准曲线，其相关系数R²＝0.9999；

B、检测样品

取待检测的蜂蜜样品分别与标准品相同的条件分析，得出检测样品的吸光值，与标准曲线对照作为溶菌酶定量依据：

B-1、取样品蜂蜜5g加5mL 0.01moL pH 6.5的磷酸盐缓冲液充分溶解；

B-2、取分子量截留范围6000-8000的10cm透析袋，在蒸馏水中煮沸10分钟，冷却至室温，溶解的蜂蜜全部装入已煮过的透析袋中，在0.01moLpH 6.5的磷酸盐缓冲液透析5天，每天更换透析液；

B-3、将透析袋取出，埋入聚乙二醇20000中浓缩6h，将蜂蜜透析液 移至离心管5000rpn/min离心分离10min，将沉淀去除，取上清液定容至5mL；

B-4、将步骤B-3的蜂蜜样品提取物置紫外可见分光光度计，以0.85％的NaCl作对照，290nm下测样品浓度，与标准曲线比较得出样品的溶菌酶浓度作为定性或定量依据。