[发明专利]一种蜂蜜中溶菌酶的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种蜂蜜中溶菌酶的检测方法，属于紫外可见分光光度分析技术领域。

背景技术

蜂蜜是用植物花蜜或植物生长部分的分泌物、或在植物生长部分上的抽吸植物的昆虫的排泄物制造。蜜蜂营养丰富且成分复杂，含有单糖，双糖，多糖，多种蛋白质氨基酸及酚酸类物质和微量元素。蜂蜜除具营养作用还具有促进消化吸收，镇静安眠，提高机体的免疫力等保健作用。经市场调查发现，全国有近50％的蜂产品不合格，个别地区甚至达到了70％左右。假蜂蜜是用蜂蜜香精、糖浆、白糖、水配制而成。既无营养成分又无功效成分。假蜂蜜不仅损害了消费者利益，而且严重影响了行业的发展。因此真假蜂蜜的鉴别技术是控制蜂蜜质量的有效方法。文献报道，目前应用的真假蜂蜜的鉴别方法有还原糖的测定、水分的测定、羟甲基糠醛的测定。这些鉴别方法早已被造假者掌握。因此目前还没有最有效的鉴别真假蜂蜜的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蜂蜜中溶菌酶的检测方法，溶菌酶是蜂蜜中的特有成分，具有溶细菌作用，而人工蜂蜜中不含溶菌酶。本发明利用溶菌酶的理化性质建立蜂蜜中溶菌酶的检测方法，用于真假蜂蜜的鉴别。

本发明的技术方案是这样实现的：这种蜂蜜中溶菌酶的检测方法，其特征包括如下步骤：

A、建立溶菌酶标准曲线

以溶菌酶标准试剂为标准品，通过紫外分光分析在290nm下测定其吸光值，建立溶菌酶标准曲线；

B、检测样品

取待检测的蜂蜜样品分别与标准品相同的条件分析，得出检测样品的吸光值，与标准曲线对照作为溶菌酶定性或定量依据。

所述的蜂蜜中溶菌酶的检测方法，其特征包括如下步骤：

A、标准品溶菌酶测定

A-1、称取溶菌酶标准品125mg溶于250mL 0.85％ NaCl溶液中，配成500ug/mL的使用液，分别取使用液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL于10mL容量瓶中，用0.85％ NaCl定容至刻度，配制成系列应用液。

A-2、扫描波长，取使用液于紫外可见分光光度计220nm-400nm进行光谱扫描，扫描结果为溶菌酶在290nm有最大吸收峰；

A-3、标准曲线制备

将系列应用液分别在紫外可见分光光度计290nm下测定，做标准曲线，其相关系数R²＝0.9999；

B、蜂蜜样品测定

B-1、取样品蜂蜜5g加5mL 0.01moL pH 6.5的磷酸盐缓冲液充分溶解；

B-2、取分子量截留范围6000-8000的10cm透析袋，在蒸馏水中煮沸10分钟，冷却至室温，溶解的蜂蜜全部装入已煮过的透析袋中，在0.01moLpH 6.5的磷酸盐缓冲液透析5天，每天更换透析液；

B-3、将透析袋取出，埋入聚乙二醇20000中浓缩6h，将蜂蜜透析液移至离心管5000rpn/min离心分离10min，将沉淀去除，取上清液定溶至5mL；

B-4、将步骤B-3的蜂蜜样品提取物置紫外可见分光光度计，以0.85％NaCl作对照，290nm下测样品浓度，与标准曲线比较得出样品的溶菌酶浓度作为定性或定量依据。

本发明与现有蜂蜜检测技术相比，其优点和积极效果表现在：

(1)蜂蜜呈酸性，溶菌酶在酸性条件下稳定且耐热，因此溶菌酶在蜂蜜贮藏过程不易损失，选择溶菌酶作为蜂蜜鉴别的一个指标是可行的。

(2)方法精密准确，重现性好：对6份同样的样品各取5g用同样的方法进行提取，用紫外可见分光光度计进行检测。RSD值为2.10％。

(3)平均加标回收率为96.0％

(4)本发明选用11种蜂蜜共119份样品作为研究对象，计算出正常蜂蜜中溶菌酶含量范围，并依据此范围作为判定真假蜂蜜的标准，操作简单，耗时短，具有回收率高、准确度高等优点。

附图说明

图1是溶菌酶的紫外可见分光光度计的光谱扫描图

图2是溶菌酶的标准曲线图

具体实施方式

A、标准品溶菌酶测定

A-1、称取溶菌酶标准品125mg溶于250mL 0.85％ NaCl溶液中，配成500ug/mL的使用液，分别取使用液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL于10mL容量瓶中，用0.85％ NaCl定容至刻度，配制成系列应用液。

A-2、扫描波长，取使用液于紫外可见分光光度计220nm-400nm进行光谱扫描，扫描结果为溶菌酶在290nm有最大吸收峰，如图1所示；

A-3、标准曲线制备