[发明专利]高纯度脂肽、脂肽胶束及其制备方法

权利要求书

1.纯化达托霉素的方法，

包括以下步骤：

a)提供脱水-达托霉素和β-异构体总量至少为2.5％的达托霉素制剂；

b)在有改良缓冲液的情况下使达托霉素制剂结合在阴离子交换树脂上，条件是使达托霉素以单体和非胶束状态结合在阴离子交换树脂上；

c)在有改良缓冲液的情况下清洗阴离子交换树脂，条件是洗脱脱水-达托霉素但保留达托霉素；

d)在有改良缓冲液的情况下在可使达托霉素与达托霉素β-异构体分离的条件下洗脱达托霉素；

e)得到至少95％纯的达托霉素，或至少98％纯的达托霉素，或仅含1％脱水-达托霉素和1％达托霉素β-异构体的达托霉素、或仅含0.5％脱水-达托霉素和1％达托霉素β-异构体的达托霉素、或仅含0.01％脱水-达托霉素和1％达托霉素β-异构体的达托霉素、或仅含1％杂质1-14之一的达托霉素，或仅含0.5％图12所示峰1-14定义的任一种杂质的达托霉素。

2.权利要求1所述的方法，其中的阴离子交换树脂是PorosD50或PorosP150。

3.权利要求1或2所述的方法，其中的离子改良缓冲液含有摩尔浓度为2-6M的尿素，pH为6.0 7.0。

4.权利要求1所述的方法，还包括过滤和浓缩洗脱的达托霉素的步骤。

5.纯化达托霉素的方法，包括以下步骤：

a)用正癸酸原料发酵玫瑰孢链霉菌，在发酵肉汤中产生达托霉素；

b)澄清发酵肉汤，得到澄清的溶液；

c)使澄清溶液经过阴离子交换色谱法以得到富含达托霉素的制剂；

d)使富集的达托霉素制剂经过疏水相互作用色谱法以得到半纯化的达托霉素制剂；并且

e)使半纯化的达托霉素制剂经过改良缓冲液增强的阴离子交换色谱法以得到至少95％纯的达托霉素，或至少98％纯的达托霉素，或仅含1％脱水-达托霉素和1％达托霉素β-异构体的达托霉素、或仅含0.5％脱水-达托霉素和1％达托霉素β-异构体的达托霉素、或仅含0.01％脱水-达托霉素和1％达托霉素β-异构体的达托霉素、或仅含1％杂质1-14之一的达托霉素，或仅含0.5％图12所示峰1-14定义的任一种杂质的达托霉素。

6.根据权利要求5所述的方法，其中步骤a)调节正癸酸以达到发酵过程中正癸酸的剩余浓度为每百万份中不大于50份(ppm)。

7.根据权利要求5所述的方法，其中步骤b)所述的澄清包括用含有丁醇的缓冲液提取发酵肉汤。

8.根据权利要求5所述的方法，其中步骤c)的阴离子交换色谱法在FP-DA13树脂上进行。

9.根据权利要求5所述的方法，其中步骤d)的疏水相互作用色谱法在HP-20ss树脂上进行。

10.根据权利要求9所述的方法，其中疏水相互作用色谱法在pH6.0-7.0下进行，并且溶剂浓度低于在pH4.0-5.0下进行疏水相互作用色谱法时所用的溶剂浓度。

11.根据权利要求10的方法，其中用10-20％浓度乙腈洗脱半纯化的达托霉素。

12.根据权利要求10的方法，其中用20-25％浓度异丙醇洗脱半纯化的达托霉素。

13.根据权利要求10，11或12所述的方法，其中通过改变树脂的pH，不经过除去溶剂的步骤而回收HP-20ss树脂。

14.根据权利要求5所述的方法，其中步骤e)的改良缓冲液增强的阴离子交换色谱法在PorosD50或Poros150树脂上进行。

15.根据权利要求14所述的方法，其中步骤e)的改良缓冲液增强的阴离子交换色谱法包括以下步骤：

i)将步骤d)得到的半纯化的达托霉素制剂置于适于改良缓冲液增强的阴离子交换色谱法的缓冲液中；

ii)在有改良缓冲液的情况下将达托霉素制剂结合到阴离子交换树脂上，条件是使其中的达托霉素以单体和非胶束的状态结合到阴离子交换树脂上；

iii)在有改良缓冲液的情况下清洗阴离子交换树脂，条件是洗脱脱水-达托霉素而保留达托霉素；并且

iv)在有改良缓冲液的情况下洗脱达托霉素，条件是使达托霉素与β-异构体分离。