[发明专利]高纯度脂肽、脂肽胶束及其制备方法

说明书

本申请是专利申请号为018052126的专利申请的分案申请。

发明的技术领域

本发明涉及高度纯净形式的脂肽，包括达托霉素，它是一种对革兰氏阳性细菌-包括耐受常规抗生素的菌株-具有有力杀菌活性的脂肽抗生素。本发明还涉及用于制备高度纯净形式脂肽的方法。本发明进一步涉及脂肽的胶束。本发明还涉及脂肽胶束的药物组合物和使用这些组合物的方法。本发明还涉及从脂肽的无关联单体制备脂肽胶束和转化脂肽胶束为无关联单体的方法。本发明还涉及利用胶束制备脂肽的方法，该方法容易达到商业生产的规模。

发明的背景

革兰氏阳性感染——包括由耐药性细菌导致的那些——发病率的迅速增加已经重新引起人们对开发新型抗生素的兴趣。其中一类是脂肽抗生素，包括达托霉素。达托霉素对临床上有关的革兰氏阳性细菌具有有力的体外杀菌活性，这些细菌导致严重的和危及生命的疾病。这些细菌包括耐药性病原体，例如万古霉素耐受性肠球菌(VRE)、甲氧西林耐受性金黄色葡萄球菌(MRSA)、糖肽中间体易感性金黄色葡萄球菌(GISA)、凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)和青霉素耐受性肺炎链球菌(PRSP)，对它们很少有可供替代的治疗剂。例如参见Tally等，1999，Exp.Opin.Invest.Drugs8：1223-1238，以下称为“Tally”。达托霉素的抑制作用是迅速的、浓度依赖性体外与体内杀菌作用，和相对长效的浓度依赖性体内抗生素后作用。

Baltz在这本书中描述了达托霉素，即：《抗生素的生物工艺学》(BiotechnologyofAntibiotics)，第二版，编辑：W.R.Strohl(NewYork：MarcelDekker，Inc.)，1997，415-435页，以下称为″Baltz.″。达托霉素，也被称为LY146032，是一种能从玫瑰孢链霉菌(Streptomycesroseosporus))发酵衍生得到的环状脂肽抗生素。

达托霉素是玫瑰孢链霉菌(S.Roseosporus)的A-21978C₀因子型抗生素中的一员，它由连接到一个环状13-氨基酸肽的N-末端色胺酸上的癸酰基侧链构成(图1)。达托霉素有很好的作用性，因为它抗多数革兰氏阳性细菌高度有效，并具有高杀菌性和快速作用性，具有低的耐药性几率，能有效地对抗具有抗生素耐药性的生物。现在将此化合物开发成各种制剂以治疗由细菌引起的严重感染，细菌包括--但不限于--甲氧西林耐受性金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)(MRSA)和万古霉素耐受性肠球菌(enterococci)(VRE)。

一个美国专利描述了包括达托霉素(LY146032)的A-21978C抗生素及其衍生物，和制造并分离A-21978C抗生素及其衍生物的方法。

美国专利Re.32,333、Re.32,455和4,800,157记载了在水下需氧发酵条件下通过培养玫瑰孢链霉菌(Streptomycesroseosporus))NRL15998而合成达托霉素的方法。美国专利4,885,243描述了一种通过用癸脂肪酸或其脂或盐供给发酵培养基养料而合成达托霉素的改进方法。

美国专利Re.32,310、Re.32,311、4,537,717、4,482,487和4,524,135描述了A-21978C抗生素的脱酰基方法，和此过程中产生的肽核及抗生素衍生物的再酰化方法。所有这些专利都描述了一种纯化的脱酰基的A-21978C抗生素核或其衍生物，它们是通过过滤发酵肉汤而分离，然后用DiaionHP-20色谱法和硅胶/C18色谱法纯化的。

美国专利Re.32,333和Re.32,455公开了一种纯化方法，用此方法所有发酵肉汤的滤出液通过一系列沉淀和萃取步骤而得到粗的A-21978C化合物。这种粗的化合物进一步在IRA-68上进行离子交换色谱法和两次硅胶色谱法纯化。单独的A-21978C₀因子由反相硅胶或硅胶/C18分离。美国专利Re.32,333和Re.32,455还公开可以通过使用DiaionHP-20树脂的制备色谱法并随后进行硅胶柱色谱法的方法纯化A-21978C。