[发明专利]在活性位点环区中具有额外氨基酸残基的I－S1和I－S2亚组枯草杆菌酶

权利要求书

1.一种I-S1和I-S2亚组的枯草杆菌酶，其在从95-103位的活性位点环(b)区中的103位具有至少一个额外的氨基酸残基，由此所述额外氨基酸残基相应于在103-104位之间至少一个氨基酸残基的插入片段。

2.根据权利要求1的分离的枯草杆菌酶，其中所述枯草杆菌酶是在前体枯草杆菌酶103-104位之间具有至少一个插入的氨基酸残基的构建的变体。

3.根据权利要求1或2的分离的枯草杆菌酶，其选自：

X103X{A，T，G，S}，

X103X{D，E，K，R}，

X103X{H，V，C，N，Q}，和

X103X{F，I，L，M，P，W，Y}

4.根据权利要求3的分离的枯草杆菌酶，其中所述至少一种额外或插入的氨基酸残基选自T、G、A和S。

5.根据权利要求3的分离的枯草杆菌酶，其中所述至少一种额外或插入的氨基酸残基选自带电氨基酸残基D、E、H、K和R，更优选选自D、E、K和R。

6.根据权利要求3的分离的枯草杆菌酶，其中所述至少一种额外或插入的氨基酸残基选自亲水性氨基酸残基C、N、Q、S和T，更优选选自N、Q、S和T。

7.根据权利要求3的分离的枯草杆菌酶，其中所述至少一种额外或插入的氨基酸残基选自小的疏水性氨基酸残基A、G和V。

8.根据权利要求3的分离的枯草杆菌酶，其中所述至少一种额外或插入的氨基酸残基选自大的亲水性氨基酸残基F、I、L、M、P、W和Y，更优选选自F、I、L、M和Y。

9.根据前述任一权利要求的分离的枯草杆菌酶，其中所述至少一种额外或插入的氨基酸残基包含在活性位点环(b)中的一个以上的额外或插入的氨基酸残基。

10.根据前述任一权利要求的枯草杆菌酶变体，其中所述的103与104位之间的插入与进一步在任一其他位置的一种或多种修饰相结合。

11.权利要求15的枯草杆菌酶变体，其中进一步的修饰是在一个或多个如下位置：27、36、57、76、87、97、101、104、120、123、167、170、206、218、222、224、235和274。

12.根据前述任一权利要求的枯草杆菌酶变体，其中所述的一种或多种修饰与位置129、131、133和194的一个或多个修饰结合。

13.根据前述任一权利要求的枯草杆菌酶变体，其中所述的枯草杆菌酶，或如果枯草杆菌酶是变体，亲本枯草杆菌酶属于I-S1亚组。

14.根据权利要求13的变体，其中所述亲本枯草杆菌酶选自ABSS168、BASBPN、BSSDY和BLSCAR，或其保留了I-S1亚组特征的功能性变体。

15.根据权利要求1-14中任一项的变体，其中枯草杆菌酶，或如果述枯草杆菌酶是变体，亲本枯草杆菌酶属于I-S2亚组。

16.根据权利要求15的变体，其中亲本枯草杆菌酶选自BLS147、BLS309、BAPB92、TVTHER和BYSYAB，或其保留了I-S2亚组特征的功能性变体。

17.权利要求3、15或16的分离的枯草杆菌酶，其选自：

S103SA，

S103ST，

S103SG，

S103SS，

S103SD，

S103SE，

S103SK，

S103SR，

S103SH，

S103SV，

S103SC，

S103SN，

S103SQ，

S103SF，

S103SI，

S103SL，

S103SM，

S103SP，

S103SW，和

S103SY.