[发明专利]细胞内病原微生物核酸定量提取和纯化方法

权利要求书

1.一种定量提取和纯化动物细胞内病原微生物核酸的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

1)提供填充吸附核酸的含硅固相材料的纯化柱或吸附核酸的含硅磁珠，其饱和吸附容量根据需要预先确定，并根据下列的公式计算被定量提取和纯化样品的细胞数量n：

n＝A/G，

其中G为每个二倍体动物细胞中基因组DNA的量，A为所述核酸吸附材料的饱和吸附容量；

2)提供待纯化细胞样品，所述待纯化细胞样品中含有的细胞数量必须不低于步骤1)中所计算的n值；

3)将上述细胞样品离心，将裂解液加入至所得细胞沉淀中，涡旋混合至溶液澄明，根据需要加热以促进被提取的核酸及基因组DNA与蛋白分离或使蛋白降解，使被提取的核酸及基因组DNA释放到溶液中，根据需要离心以去除细胞碎片；如果裂解液中不含促进核酸分子与含硅材料可逆吸附的结合剂，则向离心后获得的上清液中加入适量的结合剂。

4)将步骤3)中获得的溶液转移至纯化柱中或在其中加入磁珠，将所述纯化柱离心去除液相；或将溶液与磁珠的混合物用磁力分离磁珠和液相；

5)用洗涤液清洗经步骤4)处理过的纯化柱或磁珠1-4次，用离心或磁分离方法去除液相；

6)将洗脱液加入至经步骤5)清洗的纯化柱或磁珠中用离心或磁分离方法洗脱核酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于其中所述的病原微生物选自DNA病毒、RNA病毒、衣原体、或其任意的组合。

3.一种用于定量提取和纯化细胞内病原微生物核酸的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括以下组分：

1)填充了可逆吸附核酸的含硅材料的纯化柱或可逆吸附核酸的磁珠；

2)细胞裂解液，该细胞裂解液可包括或不包括促进核酸与含硅材料可逆结合的结合剂，所述细胞裂解液具有下列的功能：a)充分裂解、破坏需要提取的细胞，b)将细胞中的基因组DNA及病原微生物核酸充分与其相结合的蛋白质分离，使基因组DNA及病原微生物核酸释放到溶液中，c)保护基因组DNA及病原微生物核酸不被降解、破坏，d)当包括所述结合剂时，具有促进核酸分子与含硅材料可逆吸附的作用；所述裂解液能裂解的细胞数不低于纯化柱中含硅吸附材料或含硅磁珠的吸附容量所能吸附的基因组DNA对应的最大细胞数量；

3)洗涤液，所述洗涤液能将除吸附在纯化柱中含硅吸附材料或含硅磁珠上的核酸以外的其他杂质清洗掉；

4)用于从含硅吸附材料上洗脱核酸的洗脱液。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒进一步包括用于定量提取和纯化所述病原微生物核酸的试剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于其中所述的病原微生物选自DNA病毒、RNA病毒、衣原体、或其任意的组合。

6.根据权利要求3所述的试剂盒在制备用于检测动物细胞中病原微生物感染的检测试剂中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于其中所述动物选自人、人、灵长类动物、马科、猫科、犬科、啮齿类或禽类。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于其中所述病原微生物选自DNA病毒、RNA病毒、衣原体、或其任意的组合。