[发明专利]一种具有舒张血管作用的环肽类化合物及制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种环肽类化合物及其制备方法和用途，特别涉及一种从天然药用植物枸杞子中提取的具有舒张血管作用的枸杞子环肽类化合物及其制备方法和用途。

背景技术

枸杞子是我国的传统中药材，是茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum.L的干燥成熟果实，其性味甘、平，功能滋补肝肾，益精明目，主治虚劳精亏，腰膝酸痛；药理研究表明，枸杞子具有增强免疫力、抗肿瘤、防衰老、增加造血功能、抗脂肪肝等方面的药理作用；近年来对枸杞植物的化学成分研究发现含有多种氨基酸、黄酮、枸杞多糖、超氧化物歧化酶、生物碱、甾醇等活性成分，环肽类化合物在枸杞植物的干燥根皮中也有所发现，但枸杞子中迄今未见环肽类化合物的报道，也未见枸杞子具有舒张血管作用的报道。

发明内容

本发明的目的在于公布从天然中药枸杞子中提取的一种具有舒张血管作用的环肽类化合物，本发明的另一个目的在于公布该类化合物的制备方法和用途。

本发明目的是通过如下技术方案实现：

本发明环肽类化合物的制备方法包括如下步骤：

a将枸杞子用85％～100％的乙醇回流提取2-4次，合并浸取液，静置，过滤，滤液减压浓缩回收乙醇，制得相对密度为1.1～1.4的乙醇提取物浸膏；

b乙醇提取物浸膏加水制成相对密度为1.0～1.2的混悬液，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯部分，减压回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯提取物；

c乙酸乙酯提取物用苯乙烯类DIAION HP20大孔吸附树脂柱层析分离1-3次，用0％、20％、40％、60％、80％、100％的甲醇-水为洗脱剂进行梯度洗脱，按梯度收集洗脱液；各梯度洗脱液分别使用双向展开方式进行薄层层析检测：分别取10mm×10mm的硅胶板，按照双向薄层层析点样方法点样，用氯仿∶甲醇＝5-15∶1作为展开剂进行第一向展开；展开完毕并挥掉溶剂后，将硅胶板悬于底部加有2mL 6mol/L浓盐酸的密闭玻璃缸中，置于100-120℃的烘箱中加热水解1-3h，冷却后取出硅胶板，在通风橱中挥掉盐酸；将硅胶板旋转90度，以6-10∶1-3∶1-3的氯仿-甲醇-冰醋酸作为展开剂进行第二向展开；展开完毕并挥掉溶剂后，喷洒0.2％茚三酮--丙酮试剂，置于100--110℃的烘箱中加热2-10分钟，观察显色斑点；收集斑点颜色相同的流分，即得含有环肽类化合物的流分；用硅胶反复柱层析1-3次，得环肽类化合物。

本发明环肽类化合物的制备方法优选为如下步骤：

a将枸杞子用90％的乙醇回流提取3次，合并浸取液，静置，过滤，滤液减压浓缩回收乙醇，制得相对密度为1.2～1.3的乙醇提取物浸膏；

b乙醇提取物浸膏加水制成相对密度为1.0～1.1混悬液，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯部分，减压回收乙酸乙酯得乙酸乙酯提取物；

c乙酸乙酯提取物用苯乙烯类DIAION HP20大孔吸附树脂柱层析分离1-3次，用0％、20％、40％、60％、80％、100％的甲醇-水为洗脱剂进行梯度洗脱，按梯度收集洗脱液；各梯度洗脱液分别使用双向展开方式进行薄层层析检测：分别取10mm×10mm的硅胶板，按照双向薄层层析点样方法点样，用氯仿∶甲醇＝10∶1作为展开剂进行第一向展开；展开完毕并挥掉溶剂后，将硅胶板悬于底部加有2mL 6mol/L浓盐酸的密闭玻璃缸中，置于110℃烘箱中加热水解1.5h，冷却后取出硅胶板，在通风橱中挥掉盐酸；将硅胶板旋转90度，以8∶2∶2的氯仿-甲醇-冰醋酸作为展开剂进行第二向展开；展开完毕并挥掉溶剂后，喷洒0.2％茚三酮--丙酮试剂，置于105℃的烘箱中加热5分钟，观察显色斑点；收集斑点颜色相同的流分，即得含有环肽类化合物的流分；用硅胶反复柱层析3次，得环肽类化合物。

附图说明

图1：单相薄层层析图；

图2：两相薄层层析图；

图3：空白组血管环张力记录图；

图4：环肽组血管环张力记录图。

本发明用乙醇回流提取枸杞子，提取物依次用大孔吸附树脂、硅胶分离纯化，提取得到一种环肽类化合物，体外离体试验表明该环肽类化合物具有较强的舒张血管作用；通过薄层原位化学反应法进行定性筛选发现枸杞子对该反应呈阳性，且重现性好。

下面实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1本发明环肽类化合物舒张血管的离体实验：离体血管环的制备和张力测定

实验仪器：BIOPAC Systems MP-100；

实验样品：环肽样品加3ml水溶解；