[发明专利]人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性基因工程抗体RD9及其制备与应用无效
| 申请号： | 200810093980.9 | 申请日： | 2008-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN101550189A | 公开（公告）日： | 2009-10-07 |
| 发明（设计）人： | 赵小玲;杨志华;弓景波 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;C12N15/13;C12N15/63;G01N33/569;C12Q1/68;A61K39/42;A61K48/00;A61P31/14 |
| 代理公司： | 天津市三利专利商标代理有限公司 | 代理人： | 闫俊芬 |
| 地址： | 30005*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人源抗 狂犬病毒 糖蛋白 中和 基因工程 抗体 rd9 及其 制备 应用 | ||
1.一种人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性基因工程抗体RD9，其特征在于：为人源抗体，是由重链可变区VH、轻链可变区VL和以重链恒定区1 CH1 5’端12个氨基酸的序列作为连接肽AKTTAPSVYPLA构成的三结构域单链抗体VH-连接肽-VK，所述抗体基因的重链可变区基因和轻链可变区基因来源于对人源抗狂犬病毒核糖体抗体库的富集筛选，其重链可变区基因、轻链可变区基因具有如序列表<400>1和<400>3所示的序列。
2.根据权利要求1所述的一种人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性基因工程抗体RD9，其特征在于：所述抗体基因编码的多肽序列如序列表<400>2和<400>4所示的序列。
3.权利要求1所述人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性基因工程抗体RD9的制备方法，其特征在于：该方法利用基因重组技术的方法来制备，具体步骤包括：
(1)单链抗体基因库VH/k的构建：
1-1)细胞总RNA的提取和cDNA的合成；
1-2)人源抗体VH和VL基因的PCR扩增；
1-3)PCR产物的克隆及序列分析；
1-4)抗体重、轻链DNA的拼接；
(2)核糖体展示单链抗体基因库VH/k的构建；
(3)体外转录和翻译；
(4)核糖体复合物的亲和筛选；
(5)单链抗体基因库VH/k抗体基因的克隆表达；
(6)ELISA鉴定阳性克隆并进行序列分析；
(7)人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性基因工程抗体RD9的高效表达和纯化；
(8)人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性基因工程抗体RD9的特异性抗原结合活性检测；
(9)人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性基因工程抗体RD9的相对亲和力测定；
(10)人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性基因工程抗体RD9的相对稳定性研究；
(11)人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性基因工程抗体RD9中和活性的研究。
4.根据权利要求3所说的一种人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性基因工程抗体RD9的制备方法，其特征在于：所述步骤(7)人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性基因工程抗体RD9的高效表达和纯化的具体步骤包括：
(1)抗体基因表达载体的构建；
(2)在一个合适的系统或宿主中将抗体基因表达；
(3)大量培养和扩增抗体表达宿主；
(4)对表达的抗体分离纯化。
5.根据权利要求4所述的一种人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性基因工程抗体RD9的制备方法，其特征在于：上述步骤(1)中抗体基因表达载体是质粒载体或病毒载体、动物转基因的载体或者通用载体；所述抗体基因的表达载体转入一个合适的系统或宿主中加以表达，其中适合的系统或宿主包括动物或植物的细胞、细菌或酵母；该动物是转基因动物。
6.权利要求1所述人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性基因工程抗体RD9的应用，其特征在于：所述抗体在制备用于诊断或治疗狂犬病药物中的应用。
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