[发明专利]固定化蛋白酶及其在制备乳酪蛋白肽中的应用方法

权利要求书

1、一种固定化蛋白酶，其特征在于，主要按照以下方法制备得到：

(1)将0.5～10％的壳聚糖酸性溶胶，搅拌，使溶胶液滴均匀分散，滴入体积分数为2.5％的戊二醛溶液，使戊二醛溶液的最终浓度按体积分数计为0.2-3.0％，搅拌加入0.5-3.0mol/L NaOH溶液，至NaOH溶液的终浓度按体积分数计为0.05％～3.0％，于40-70℃保温反应0.5-5.0小时，静置冷却后弃去上层，依次用丙酮、无水乙醇抽洗，最后用蒸馏水冲洗，真空干燥，得到固定化载体壳聚糖微球，备用；

(2)向浓度为0.1％～5.0％的蛋白酶溶液中加入固定化载体壳聚糖微球，其中，蛋白酶溶液与固定化载体壳聚糖微球按1-4∶1的重量比进行配比；振荡吸附2-30小时，然后滴入体积分数为2.5％戊二醛溶液，使戊二醛溶液的最终浓度按体积分数计为0.2-3.0％，交联0.2-10.0小时，即得。

2、按照权利要求1所述的固定化蛋白酶，其特征在于：所述的蛋白酶选自木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、动物蛋白水解酶、碱性蛋白酶或胃蛋白酶中的任意一种或一种以上按任意比例所组成的复合酶。

3、由权利要求1或2所述的固定化蛋白酶制备得到的固定化蛋白酶柱。

4、权利要求3所述的固定化蛋白酶柱在制备乳清蛋白肽中的应用，包括：(1)预处理乳酪蛋白溶液；(2)将经过预处理的乳酪蛋白溶液流过所述的固定化蛋白酶柱，进行酶水解反应；(3)收集酶水解液，离心分离，得上清液；(4)将上清液脱色处理后再进行脱盐处理；(5)将脱盐处理后的酶解液进行纳滤处理；(6)浓缩；(7)浓缩后的产物包埋于壁材中；(8)喷雾干燥。

5、按照权利要求4的应用，其特征在于：步骤(1)中所述的预处理为：将乳酪蛋白配制成浓度为1.0-6.0mg/mL的溶液在60-100℃温度条件下预热处理5-20分钟，然后将乳酪蛋白溶液冷却至30-60℃。

6、按照权利要求4的应用，其特征在于：步骤(2)中经过预处理的浓度为1.0-6.0mg/mL的乳酪蛋白溶液以0.1-5.0mL/min的流速过固定化蛋白酶柱；所述的酶水解反应条件为：温度30-65℃，pH为4.0-9.0。

7、按照权利要求4的应用，其特征在于：步骤(4)中所述的脱色处理在以下条件下进行：将离心上清液pH调整至6.0-7.0，加入上清液重量0.5-3.0％的活性炭粉末或颗粒，于30-50℃条件下进行脱色处理，1.0-3.0小时后过滤分离。

8、按照权利要求4的应用，其特征在于：步骤(4)中所述的脱盐处理在以下条件下进行：经脱色处理的乳酪蛋白酶解液采用浸泡法或过柱法，先经24g/100mL的强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，处理30分钟后，后经24g/100mL的强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂处理30分钟，进行脱盐处理。

9、按照权利要求4的应用，其特征在于：步骤(5)中所述的纳滤处理在以下条件下进行：采用NF-1即截留分子量为2000的纳滤膜，操作压力0.3-1.0Mpa，截留分离分子量范围小于2000的乳酪蛋白肽。

10、按照权利要求4的应用，其特征在于：步骤(6)中所述的浓缩按照以下条件进行：控制真空度为600-750mmHg，在蒸发温度60-70℃条件下，将乳酪蛋白肽溶液浓缩至固形物含量为10-30％；通过真空蒸发浓缩，得到高含量的乳酪蛋白肽溶液；步骤(7)中所述的壁材由多孔淀粉与β-环糊精复合而成。