[发明专利]一种用于限制片段长度多态性研究的家蚕DNA抽提方法

权利要求书

1.一种用于限制片段长度多态性研究的家蚕DNA抽提方法，将家蚕后部 丝腺经磷酸盐缓冲液冲洗，将后部丝腺研磨至粉末；从家蚕个体的后部丝腺抽 提DNA，再采用RNA酶消解RNA，其特征在于：从后部丝腺抽提DNA和采 用RNase酶消解RNA的具体步骤为：

(1)采用DNA酶解缓冲液融化后部丝腺粉末，混匀后将溶液于48～55℃水 浴裂解6～8小时；

(2)加入与步骤(1)中溶液等体积的饱和酚，混匀后离心，取上清液；取与上 清液等体积的正丁醇与上清液混匀，离心后弃上清液，重复离心弃上清液的过 程至少1次，浓缩至步骤(1)中溶液体积的以下；采用无水乙醇和醋酸钠析出 DNA，然后用TE缓冲液溶解DNA，混匀后至少放置0.5小时；

(3)于35～39℃水浴中，采用RNase酶处理步骤(2)中的DNA溶液，消解去 除RNA；加入与DNA溶液等体积的饱和酚，混匀后离心，除去下层的酚层， 再加入同样体积的饱和酚，混匀后离心，取上清液；

(4)取与步骤(3)中的饱和酚等体积的酚氯仿，与步骤(3)所得的上清液混匀后 离心，取上清液，并取与之等体积的正丁醇混合均匀，离心后弃上清，重复离 心后弃上清的过程至少1次，浓缩至步骤(2)中的DNA溶液体积的以下；采 用无水乙醇和醋酸钠析出DNA，用70～75％的乙醇洗涤，溶解于TE缓冲液 中。

2.根据权利要求1所述一种用于限制片段长度多态性研究的家蚕DNA抽 提方法，其特征在于：步骤(1)中加入的DNA酶解缓冲液的量为5ml，步骤(1) 的水浴裂解过程中每一个小时上下颠倒5～8次混匀样品。

3.根据权利要求1所述一种用于限制片段长度多态性研究的家蚕DNA抽 提方法，其特征在于：所述离心操作的转速为4000～12000rpm/min，操作温 度为4℃，离心时间为10min。

4.根据权利要求1所述一种用于限制片段长度多态性研究的家蚕DNA抽 提方法，其特征在于：用于析出DNA的无水乙醇和醋酸钠为-20℃的冰冻无水 乙醇和3mol/L的醋酸钠，冰冻无水乙醇与醋酸钠的体积比为25∶1。

5.根据权利要求1所述一种用于限制片段长度多态性研究的家蚕DNA抽 提方法，其特征在于：步骤(2)中用于溶解DNA的TE缓冲液为1.2ml。

6.根据权利要求1所述一种用于限制片段长度多态性研究的家蚕DNA抽 提方法，其特征在于：步骤(3)中采用RNase酶消解RNA时，于37℃水浴1 小时；RNase的浓度为10mg/mL，RNase的量为1μL。

7.根据权利要求1所述一种用于限制片段长度多态性研究的家蚕DNA抽 提方法，其特征在于：步骤(4)中所述酚氯仿中酚和氯仿的体积比为1∶1。