[发明专利]一种染色体步移文库的构建方法

权利要求书

1.一种构建染色体步移文库的方法，其特征在于，包括如下步骤：

采用至少一种粘性末端限制性内切酶消化基因组DNA或其片段，得到粘性末端DNA片段；

用单链核酸外切酶处理粘性末端DNA片段，使其成为平末端DNA片段；

与接头分子连接，得到染色体步移文库。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的接头分子为一长链和一短链构成的不完全双链，其中短链与长链的3’端完全互补。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，在所述短链3’末端最后一个碱基中，核糖的第三个碳原子上的羟基被甲基替换或脱氧或磷酸化。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述长链为40-60bp，所述短链为8-15bp。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的长链为50bp，所述短链为10bp。

6.如权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，所述的单链核酸外切酶选自：

1)5’-3’单链DNA外切酶：枯草芽孢杆菌核酸外切酶、核酸外切酶VII、粗糙脉孢菌核酸外切酶；

2)3’-5’单链DNA外切酶：核酸外切酶I、DNA聚合I、核酸外切酶III及pfu DNA聚合酶。