[发明专利]一种快速从同一样品中同时抽提纯化DNA/RNA的试剂盒以及方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种快速从同一样品中同时抽提纯化DNA/RNA的试剂盒及方法。

背景技术

DNA和RNA是遗传的基本物质，既是遗传信息的载体，也是蛋白合成的模板，分离高纯度的DNA和RNA是现代分子生物学研究及相关领域，包括；农业、林业、医学、法医鉴定及临床医学诊断、分子治疗等的必要技术手段，也是不可逾越的试验过程。DNA和RNA具有易降解，难纯化的特点。它易被无处不在DNAse和RNase.降解，也很容易在抽提过程中被蛋白和DNA和RNA彼此相互污染；传统的方法，DNA和RNA的分离纯化绝大部分是单独进行，即：同一样品只抽提RNA或DNA，如：碱裂解法，PEG沉淀法、AGPC法或酸性酚法、氯化铯密度梯度离心法、Miniprep法等。它们都是抽提其中一种：RNA或DNA。现在常用的Trizol法，曾提到可同时得到DNA，但纯度极差，大多方法都必须用到毒性极强的酚和氯仿等，对环境和试验人员易造成危害。现代分子医学和分子生物学研究都必须同时检测DNA和RNA，本发明摒弃了以往的单独提取法，创造了一种全新的DNA和RNA同时抽提纯化方法，从同一样品中同时分离纯化DNA和RNA，对某些珍贵，不易得到的样品尤为重要，因为它可以大大的节约样品，同时也可缩短实验时间，这一方法适合从各种材料中提纯可用于下游各种实验的高纯度DNA和RNA，如：PCR、基因芯片、克隆酶切、Northernblot、cDNA的转录、Northern blot、RNAi等。

发明内容

因此，为了解决上述问题，本发明的发明人提出并完成了本发明。

本发明采用新型介质，包括：过滤介质和结合介质，全新独特溶液配方，结合使用特异抑制剂，使提纯的时间大大减少，而纯度，稳定性大大提高。其原理如下：

DNA和RNA快速纯化利用强变性剂(GuSCN等)和适当的缓冲系统破碎细胞，抑制各种Rnase、D N ase，释放出DNA和RNA，利用特异DNA/RNA吸附介质和吸附溶液，分别结合DNA/RNA，经洗脱同时得到纯化的DNA和RNA。这一发明将为生物科学及相关领域的研究与应用，提供DNA/RNA同时快速分离纯化，无公害实验方法；也为大规模临床诊断样品的DNA/RNA分离纯化，包括病毒DNA/RNA的分离纯化，提供简单、有效、快捷的选择。

本发明的目的为提供一种快速从同一样品中同时抽提纯化DNA/RNA的试剂盒。

本发明的另一目的为提供一种快速从同一样品中同时抽提纯化DNA/RNA的方法。

根据本发明的快速从同一样品中同时抽提纯化DNA/RNA的试剂盒包括：

1)样品裂解液，

所述裂解液的配方为：

3.5-5.5M GuSCN

2-20mM MgCl₂

10-50mM MES-NaOH，pH 6.3

10-30mM柠檬酸钠

1-10mM EDTA pH8.0

0.005-0.3％TritonX-100

0.05-0.2％NP-40

0.01-0.8％N-月桂酰肌氨酸

1-8％丙醇

5-20ul/ml β-巯基乙醇；

2)DNA结合柱前处理溶液，其配方为：

35-4.5M LiCl

0.005-0.02M HCl

0.05-0.3％TritonX-100；

3)DNA洗涤液I，其配方为：

4.5-5.5M GuHCl

5-20mM MES，pH5.5

0.5-3mM MgCl₂

0.02-0.06％Triton X-100

45-60％乙醇；

4)RNA结合溶液，其配方为；

250-750mM MES-NaOH pH5.0

65-80％乙醇；

5)RNA洗液I，其配方为：

50-200mM MES-NaOH，pH5～6，

3.5-4.5M GuSCN

0.4-1％TritonX-100

35-45％乙醇；

6)DNA/RNA洗液II，

对于植物材料所述洗液II的配方为：

70-85％乙醇

0.5-1.5％丙酮

0.005-0.05％DEPC

对于其它材料所述洗液II的配方为：

70-85％乙醇和0.005-0.05％DEPC；