[发明专利]C肽微孔板式磁颗粒化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体地，本发明公开了一种C肽微孔板式磁颗粒化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

人C肽是由31个氨基酸组成的直链，分子量3020。C肽是在胰岛素原形成胰岛素过程中释放的一段连接肽。C肽与胰岛素以等分子量从B细胞分泌到血液中。C肽无生物活性(也有少数学者认为C肽具有生物活性)，也不与细胞膜上的受体结合且不被降解，其半衰期为胰岛素的3-5倍。对使用胰岛素治疗的糖尿病患者测定C肽是较为理想的判断指标。

C肽不受肝脏酶灭活，仅受肾脏作用而排泄，在外周血中半衰期长，C肽与胰岛素无交叉反应，C肽的检测不受胰岛素抗体的干扰，也不受外源胰岛素注射的影响，能更准确地反映人胰岛β细胞的分泌功能。2003年美国糖尿病协会资助的专家委员会的报告建议将C肽和胰岛素抗体、谷氨酸脱羧酶抗体(GADAb)等自身抗体作为糖尿病分型的重要指标。

目前用于检测C肽的免疫分析方法主要有放射免疫分析、酶联免疫分析、时间分辨荧光免疫分析、化学发光免疫分析等。根据大量的试验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及发展前景来看，优先顺序依次为：化学发光免疫分析、时间分辨荧光免疫分析、放射免疫分析以及酶免疫分析。

放射免疫分析技术因其使用放射性元素作为标记物，因此对环境有放射性污染，并存在灵敏度不高，操作复杂，试剂保存时间短等缺点；酶免疫分析法存在灵敏度低，信噪比不高，线性范围窄等方法学制约因素；时间分辨荧光免疫分析对检测环境的要求较高，易受空气尘埃的干扰；化学发光免疫分析法是一种较先进而有效的方法，可使检测灵敏度达到10^-18摩尔水平，而且检测范围可达6个数量级，其酶标记物稳定，可长期使用。化学发光免疫分析技术因其高灵敏、高特异、快速、高通量等特点得到越来越广泛的应用，目前化学发光主要有酶促底物化学发光和标记物直接发光两大系列，酶促化学发光所使用示踪物一般为辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶。而标记物直接发光分为：通过改变溶液酸碱度而发光的发光物质为吖啶酯；通过电极作用的电化学发光的发光物质是三联吡啶钌。

目前微孔板式免疫分析主要有酶联免疫分析和化学发光免疫分析，而微孔板式化学发光一般将微孔板作为固相载体，通过抗体的物理吸附作用包被在微孔板上如专利(中国，申请号200610107393.1)，也有通过将亲和素或链亲和素包被在微孔板上，然后通过将生物素标记在抗体上，以亲和素-生物素较强的结合能力为桥联，间接地将抗体固定到微孔板的方法。

目前磁颗粒在化学发光的应用上主要采用单个反应杯或反应槽的形式。

本发明采用微孔板式磁颗粒整合了目前两种技术，主要体现在：(1)在微孔板上使用磁颗粒，利用磁颗粒在相同体积的情况下表面积最大的原理，较目前微孔板式化学发光固相物理吸附或用亲和素-生物素桥联方法包被抗体方式会结合更多的抗体，这样就会使反应的灵敏度更高，线性范围更宽。(2)较目前磁颗粒在化学发光的应用上采用单个反应杯或反应槽的形式相比，微孔板的反应模式因为几十或几百个反应微孔在同一块微孔板上，可以进行同时批量测量，适合大批量血清筛查(如96孔微孔板，一次就可以实现96个样本的测试)。

发明内容

本发明的目的是提供一种C肽微孔板式磁颗粒化学发光免疫分析测定试剂盒。

根据本发明C肽微孔板式磁颗粒化学发光免疫分析测定试剂盒，其中，所述试剂盒包括：

1)C肽校准品；

2)C肽单克隆抗体包被的磁颗粒；

3)辣根过氧化物酶(HRP)标记的另一株单克隆抗体或多克隆抗体；

4)微孔板；

5)洗涤液；

6)上述酶所作用的化学发光底物液。

根据本发明的试剂盒，其中，所述反应微孔板为48孔、96孔、256孔不透明微孔板。

根据本发明的试剂盒，其中，所述化学发光底物液包含A液和B液：

A液是0.2M pH值为7.4的磷酸盐缓冲液，包含4.0g/L的鲁米诺和0.2g/L的乙二醇乙二醚二胺四乙酸(EGTA)、2.5％丙三醇、0.05g/L对乙酰氨基酚；

B液是0.2M pH值为7.4的磷酸盐缓冲液，包含6％过氧化氢、9g/L氯化钠的溶液。

化学发光底物液包含A液和B液使用方法：A、B液双组分试剂，在使用前根据使用量计算完毕后A：B为1：1混合，应保证在6h内使用。

本发明的再一目的是提供一种制备上述试剂盒的制备方法。