[发明专利]一种检测活病毒滴度的方法无效
| 申请号： | 200810102905.4 | 申请日： | 2008-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN101545907A | 公开（公告）日： | 2009-09-30 |
| 发明（设计）人： | 李益民;叶祥忠 | 申请（专利权）人： | 北京万泰生物药业股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/577 | 分类号： | G01N33/577;G01N33/569;G01N21/78 |
| 代理公司： | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 | 代理人： | 孙皓晨;费碧华 |
| 地址： | 102206*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 病毒 方法 | ||
1、一种检测病毒滴度的方法，包括：
(1)将稀释的待检病毒感染贴壁细胞、培养后，用固定剂固定细胞；
(2)向已固定的细胞中加入病毒抗血清或单克隆抗体，培养、洗涤，加入辣根过氧化物酶标记的二抗，加入显色剂显色，产生红色或褐色斑点；或者向固定的细胞中加入辣根过氧化物酶标记的病毒抗血清或单克隆抗体，培养、洗涤，加入显色剂显色，产生红色或褐色斑点；
(3)根据以下公式计算病毒滴度：病毒滴度＝红色或褐色斑点均数×待检测病毒的稀释倍数÷待检测病毒感染贴壁细胞的剂量，待检测病毒感染贴壁细胞的剂量单位为毫升；或者根据稀释度和产生斑点的孔数，计算病毒的1gTCID50值。
2、按照权利要求1的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的贴壁细胞选自MRC-5，2BS、WI-38、KMB17或Vero细胞。
3、按照权利要求1的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的培养是在5％CO2培养箱中在培养温度为37℃的条件下培养。
4、按照权利要求1的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的固定剂选自甲醛、甲醇、乙醇-乙酸、戊二醛或丙酮中的一种或几种的混合物。
5、按照权利要求1的方法，其特征在于：步骤(1)中将待检测的病毒采用一步稀释或系列稀释法稀释后感染贴壁细胞。
6、按照权利要求1的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的培养为在温度为25-37℃的条件下培养20-90分钟。
7、按照权利要求6的方法，其特征在于：所述的培养为在温度为25-37℃的条件下培养30-60分钟。
8、按照权利要求1的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的显色剂是3-氨基-9-乙基-咔唑或二氨基联苯胺。
9、按照权利要求1的方法，其特征在于：所述的待检测病毒为甲肝病毒、狂犬病毒、风疹病毒、麻疹病毒、乙脑病毒、水痘-带状疱疹病毒或SARS病毒。
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