[发明专利]乙型肝炎病毒核心抗体IgM化学发光免疫分析测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及免疫诊断技术领域，具体地，本发明提供了一种乙型肝炎病毒核心抗体IgM(抗HBc-IgM)化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

乙型肝炎是一种发病率较高，对人类有着巨大危害的传染性疾病。机体感染乙型肝炎病毒(HBV)后，体液免疫反应首先产生以IgM为主的免疫球蛋白，随后IgM抗体滴度下降，IgG效价迅速上升。因此，抗HBc-IgM的检测可作为HBV感染早期诊断的指标，尤其是对乙肝表面抗原(HBsAg)阴性的急性肝炎病人有鉴别诊断意义。同时抗HBc-IgM与HBV在体内活动性复制成正相关，抗HBc-IgM阳性提示患者近期有乙型肝炎病毒感染或慢性乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒有活动性复制，患者血液有很强的传染性。有报道指出，在急性乙型肝炎病毒感染后抗HBc-IgM可持续存在多年，在慢性乙型肝炎病程中，抗HBc-IgM的出现与病情急性活动的高峰一致或者稍晚，并认为随着病情的控制而好转，部分患者的抗HBc-IgM可能阴转，所以抗HBc-IgM阳性还要结合临床症状具体分析。随着医学检验水平的提高，对乙肝患者进行抗HBc-IgM的检测对于乙肝的分型及治疗有着重要的意义。

目前用于检测乙型肝炎病毒核心抗体IgM的免疫方法主要有酶免疫测定(enzyme immunoassay，EIA)、放射免疫测定(radioimmunoassay，RIA)、免疫荧光测定(enzyme-linked fluorescence assay，ELFA)、微粒子酶免发光分析(microparticleenzyme immunoassay，MEIA)以及直接标记化学发光免疫测定(chemiluminescenceimmunoassay，CLIA)。这些超微量检测技术的基本理论大体相同，但是所用示踪剂及所发出的信号各不相同。根据大量的试验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及发展前景来看，依次为：化学发光免疫分析、荧光免疫分析、放射免疫分析以及酶免疫分析。

放射免疫分析技术因其使用放射性元素作为标记物，因此对环境有一定污染性，并存在操作复杂，测定结果不稳定，试剂保存时间短等缺点。酶免疫分析法灵敏度低，影响因素较多，易造成假阴性和假阳性。化学发光免疫分析法是一种较先进而有效的方法，可使检测灵敏度达到10^-18摩尔水平，而且检测范围可达6个数量级，又因为酶标记物稳定，可长期使用，因而得到了越来越多的关注。

用酶促化学发光免疫分析检测乙型肝炎病毒核心抗体IgM是先进而有效的方法，有助于促进化学发光免疫分析技术在临床检验、检测中的应用与发展。

发明内容

本发明将化学发光技术与乙型肝炎病毒核心抗体IgM的免疫分析有效结合，通过大量的实验检验及临床研究表明本发明的试剂盒具有较高的特异性、敏感性和重复性，为临床诊断、各级血站、采浆站和科研工作提供了一种非常有价值的检测手段。

本发明的目的是提供一种乙型肝炎病毒核心抗体IgM的化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。

根据本发明的试剂盒包括：乙型肝炎病毒核心抗体IgM阴阳性对照品；抗人IgM包被的载体；酶标记的乙型肝炎病毒核心抗体；中和抗原；上述酶所作用的化学发光底物和浓缩洗涤液。

根据本发明的试剂盒，其中，所述乙型肝炎病毒核心抗体IgM阳性对照品以新生牛血清为基质；所述抗人IgM包被的载体为微孔板或塑料管；所述标记乙型肝炎病毒核心抗体的酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶；所述中和抗原为乙肝病毒核心抗原；所述浓缩洗涤液为含吐温20的Tris-HCl缓冲液或含吐温20的磷酸盐缓冲液(PBST)。

根据本发明的试剂盒，所述碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶标记乙型肝炎病毒核心抗体的工作浓度为1:1000-5000，其中，碱性磷酸酶稀释液采用的是含10％新生牛血清，0.1％生物防腐剂Proclin300，150mM NaCl的0.10M Tris-HCl缓冲液(pH7.5)；辣根过氧化物酶稀释液采用的是含20％新生牛血清，0.1％生物防腐剂Proclin300的0.02M磷酸盐缓冲液(pH7.4)。所述乙肝病毒核心抗原的工作浓度为1:4000-9000，其中所用稀释液同上所述。