[发明专利]一种富含有机硒和有机锌的复合益生菌制剂

权利要求书

1.一种富含有机硒和有机锌的复合益生菌制剂，其特征在于，该制剂是由以下方法生产而成的：

1)菌种：产朊假丝酵母(Candida utilis)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus.acidophilus)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)；

2)菌剂生产培养基质量比：0.5％～2％葡萄糖，0.5％～2％酵母浸膏，0～1％牛肉浸膏，pH自然，100～120℃，高压蒸汽灭菌15min，备用；

3)斜面活化培养基：

产朊假丝酵母活化培养基：5g酵母浸膏、10g蛋白胨、20g葡萄糖、20g琼脂、1000ml水，pH为6.6～7.0，115℃，高压蒸汽灭菌15min，备用；

嗜酸乳杆菌和鼠李糖乳杆菌活化培养基：蛋白胨10g，酵母膏5g，葡萄糖20g，牛肉膏10g，乙酸钠5g，柠檬酸三铵2g，吐温801ml，MgSO₄·7H₂O 0.58g，MnSO₄·4H₂O 0.05g，K₂HPO₄ 2g，琼脂20g，水1000ml，pH为6.2～6.4；115℃，高压蒸汽灭菌15min，备用；

嗜热链球菌活化培养基：胰蛋白胨5g，鱼蛋白胨5g，牛肉膏5g，酵母浸膏2.5g，抗坏血酸0.5g，硫酸镁0.25g，甘油10g，乳糖3g，磷酸氢二钾5g，琼脂20g，水1000ml，pH为6.7～7.1，115℃，高压蒸汽灭菌15min.，备用；

4)液体活化培养基：斜面活化培养基中不加琼脂；

5)无机硒源：配制含硒量0.2～2mg/ml的亚硒酸钠溶液，100～125℃，高压蒸汽灭菌20～30min，备用；

6)无机锌源：配制含锌量10～100mg/ml的硫酸锌溶液，100～125℃，高压蒸汽灭菌20～30min，备用；

7)硒锌转化及益生菌生长促进剂配制：按每升水中含有50g寡糖、0.5g蛋氨酸、50g硫酸铵、10g磷酸氢二钾和10g磷酸二氢钾配制成混合溶液，115℃，高压蒸汽灭菌15min；

8)菌种的活化与种子液的获得

将保存在4℃的产朊假丝酵母接种于斜面活化培养基上，20～30℃，培养30～40h；如此连续活化3～5次后，再接种于液体活化培养基中，20～30℃，220r/min，摇床培养30～40h，得到产朊假丝酵母液体种子液，其CFU达到10⁹/ml以上；

将保存在4℃的嗜酸乳杆菌接种于斜面活化培养基上，30～40℃，培养30～40h；如此连续活化3～5次后，再接种于液体活化培养基中，30～40℃，培养30～40h，得到嗜酸乳杆菌液体种子液，其CFU达到10¹⁰/ml以上；

将保存在4℃的鼠李糖乳杆菌接种于斜面活化培养基上，30～40℃，培养30～40h；如此连续活化3～5次后，再接种于液体活化培养基中，30～40℃，培养30～40h，得到鼠李糖乳杆菌液体种子液，其CFU达到10⁹/ml以上；

将保存在4℃的嗜热链球菌接种于斜面活化培养基上，30～43℃，培养30～40h；如此连续活化3～5次后，再接种于液体活化培养基中，30～43℃，培养30～40h，得到嗜热链球菌液体种子液，其CFU达到10⁹/ml以上；

9)菌剂生产

将无机硒源、无机锌源和硒锌转化及益生菌生长促进剂加入到菌剂生产培养基中，使培养基中硒浓度为2～4mg/kg，锌的浓度为100～200mg/kg，硒锌转化及益生菌生长促进剂的质量比浓度为2％～5％；将产朊假丝酵母、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜热链球菌种子液接种体积比例按1∶2∶2∶2接种于培养基中，总接种量体积比为3～7％，培养温度为20～40℃，通气量为：0.05m³/h；摇床转速：70r/min，罐压：0.04Mpa，培养时间24～48h；

10)产品获得：培养结束后，培养液在室温下3000r/min离心20min，得到菌泥，加入保护剂，真空冷冻干燥，即得到一种富含有机硒和有机锌的复合益生菌产品。

2、根据权利要求1所述一种富含有机硒和有机锌的复合益生菌制剂，其特征在于，加入保护剂为2kg脱脂奶粉和10g蔗糖的混合物。

3、根据权利要求1或2所述一种富含有机硒和有机锌的复合益生菌制剂，其特征在于，

该产品中产朊假丝酵母、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和嗜热链球菌的CFU数分别为10⁸/g、10⁹/g、10⁸/g和10⁸/g以上，有机硒含量为50～150μg/g，有机锌含量为2.5～7.5mg/g。