[发明专利]固定化混合菌种发酵纤维素水解液制备燃料乙醇的方法

权利要求书

1、一种固定化混合菌种发酵纤维素水解液制备燃料乙醇的方法，其特征在于利用固定化嗜单宁管囊酵母(Pachysolen tannophilus)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的混合菌种接入稀酸水解液，采用补料批式发酵的方式进行发酵。通过以下步骤生产燃料乙醇：

将嗜单宁管囊酵母(P.tannophilus)和酿酒酵母(S.cerevisiae)同时驯化，培养基中水解液的比例随着驯化次数的增加按20-50％的比例增长，至驯化培养基全部是水解液。将驯化培养的嗜单宁管囊酵母和酿酒酵母菌悬液按1∶1的比例接入3％的海藻酸钠溶液中，注入2％CaCl₂水溶液中，固化2-6h，无菌水洗涤海藻酸钠凝胶球(直径2-3mm)，移入1％硫酸铝溶液中，0-4℃下固化12-24h得到固定化混合菌种的凝胶球。

固定化的凝胶球放于增殖培养基中，28-35℃，100-150r/min条件下增殖培养20-48h，待增殖好后，将固定化凝胶球按20-50％的填充率加入到木质纤维素水解液的发酵培养基中，初始糖浓度为3-15％，调节pH值为3.0-7.0，在28-35℃、100-150r/min条件下摇床发酵，间隔12-48h后补充新鲜的水解糖液，进行补料分批发酵。

上述驯化培养基配方为木糖10-50g/L，葡萄糖10-50g/L，尿素2.5g/L，酵母膏5g/L，(NH₄)₂SO₄ 5g/L，KH₂PO₄ 2g/L，MgSO₄·7H₂O 1g/L，30℃，160rpm，水解液比例按5-40％递增，每个批次驯化时间为18-24h，驯化批次6-24次，酵母菌液接种量10-20％。

2、如权利要求1所述固定化混合菌种发酵纤维素水解液制备燃料乙醇的方法，其特征在于发酵菌种选用嗜单宁管囊酵母(P.tannophilus)和酿酒酵母(S.cerevisiae)。

3、如权利要求1所述固定化混合菌种发酵纤维素水解液制备燃料乙醇的方法，其特征在于利用海藻酸钙凝胶球固定混合菌种，加入1％硫酸铝加强固定化凝胶球的强度，固化时间为12-24h。

4、如权利要求1所述固定化混合菌种发酵纤维素水解液制备燃料乙醇的方法，其特征在于驯化培养基中水解液的比例按按5-20％递增，每个批次驯化时间为18-24h，驯化批次6-24次，酵母菌液接种量10-20％。

5、如权利要求1所述固定化混合菌种发酵纤维素水解液制备燃料乙醇的方法，其特征在于固定化凝胶球按20-50％的填充率加入到纤维素水解液的发酵培养基中，纤维素水解液初始糖浓度为3-15％，pH值为3.0-7.0，28-35℃、100-150r/min条件下摇床发酵。

6、如权利要求1所述固定化混合菌种发酵纤维素水解液制备燃料乙醇的方法，其特征在于生产燃料乙醇用原料可以是玉米秸秆、玉米芯、稻草秸秆、废弃的箱纸板、瓦楞原纸、废报纸、废弃的办公室用纸等。