[发明专利]检测林可霉素药物的酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测林可霉素药物的酶联免疫试剂盒，其特别适于动物组织和蜂蜜中林可霉素药物残留的检测。

技术背景

林可霉素(lincomycin)又称洁霉素或林肯霉素，是由链霉菌发酵产生的林可酰胺类抗生素(结构式如图1)，有较强的抑菌活性。其残留通过食物链进入人体后累积可以导致细菌耐药性，因此，各国都对其作出限量要求，我国农业部235号文件规定其残留限量为0.05ppm(鸡蛋)，日本肯定列表规定其残留限量为0.02ppm(鸡可食用内脏)。

林可霉素残留量的常规检测方法主要有高效液相色谱(HPLC)、液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)、纸色谱等，由于复杂的仪器设备和繁琐的过程以及对检验人员的高技能要求，不适合现场监控和大量样本的筛查。

发明内容

本发明的目的在于针对上述不足提供一种用于林可霉素检测的酶联免疫试剂盒，其操作简单适，适合现场大批量样品的筛选。

本发明试剂盒，它含有：

(1)包被有包被原的酶标板(包被原为抗原、抗体或抗抗体)；

(2)酶标记物(为酶标记半抗原(某些地方写的是酶标记半抗原，请确认并统一)、酶标记抗体或酶标记抗抗体)；

(3)林可霉素特异性抗体工作液(当酶标板上包被抗原且酶标记物为酶标记抗抗体或酶标板上包被抗抗体且酶标记物为酶标记抗原时含有)；

(4)林可霉素标准品溶液；

(5)底物显色液；

(6)终止液；

(7)浓缩洗涤液；

(8)浓缩复溶液。

本发明所提供的检测林可霉素的酶联免疫试剂盒，包括林可霉素特异性抗体工作液及预包被包被原的酶标板和酶标记物工作液；所述酶标记物为酶标记的抗抗体，酶标记林可霉素半抗原或酶标记林可霉素特异性抗体；所述抗抗体为羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体。

所述林可霉素半抗原是林可霉素通过琥珀酸酐法得到的。

所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶，其中优选辣根过氧化物酶；酶标记的羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体是采用戊二醛法或过碘酸钠法将标记酶与抗抗体进行偶联得到的；酶标记林可霉素半抗原是采用混合酸酐或碳化二亚胺法将标记酶与林可霉素半抗原偶联得到的；酶标记特异性抗体是采用戊二醛法或过碘酸钠法将标记酶与特异性抗体偶联得到的，辣根过氧化物酶可采用现有技术中的多种方法将其与抗抗体进行偶联，如戊二醛法，过碘酸钠法等，本发明经过长期的劳动创造将过碘酸钠法进行了改良，使其省时、降低辣根过氧化物酶(HRP)与抗抗体的浓度比率，节省了原材料。

所述林可霉素特异性抗体可为林可霉素单克隆抗体或林可霉素多克隆抗体；它们均是用林可霉素半抗原与载体蛋白采用混合酸酐法或碳化二亚胺法得到的偶联物作为免疫原得到的；所述林可霉素多克隆抗体可为鼠源、马源、羊源、兔源或豚鼠源抗体，所述林可霉素单克隆抗体优选为林可霉素鼠单克隆抗体，所述林可霉素多克隆抗体优选为林可霉素兔多克隆抗体。

所述林可霉素单克隆抗体优选为林可霉素的单克隆杂交瘤细胞株C-1-3CGMCC No.2398分泌的单克隆抗体。

所述林可霉素单克隆杂交瘤细胞株C-1-3CGMCC No.2398(分类命名：对林可霉素药物的单克隆杂交瘤细胞株)已于2008年03月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮编100101)。

以上抗体均可以用林可霉素半抗原与载体蛋白的偶联物作为免疫原制备。所述载体蛋白可为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白(BCG)、牛血清蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白和纤维蛋白原等常用载体蛋白；所述林可霉素半抗原与载体蛋白的偶联物可通过将林可霉素半抗原和载体蛋白用混合酸酐法或碳化二亚胺法进行偶联得到。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括林可霉素标准品溶液、显色剂、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液。

所述浓缩洗涤液优选为1.0％～1.5％吐温20和0.5％硫柳汞防腐剂的磷酸盐缓冲液。

当标记酶为辣根过氧化物酶时，显色剂由显色液A液和显色液B液组成，显色液A液为过氧化氢或过氧化脲，所述显色液B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，终止液为终止液为1～2mol/L的硫酸或盐酸缓冲液；当标记酶为碱性磷酸酯酶时，显色液为对硝基磷酸盐缓冲液、终止液为1～2mol/L氢氧化钠溶液。

所述浓缩复溶液液优选为含有5％牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液。