[发明专利]一种检测甲状腺球蛋白的化学发光免疫分析测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学免疫检测分析技术领域，具体地提供了一种人甲状腺球蛋白酶促化学发光免疫测定试剂盒，适用于甲状腺球蛋白的酶促化学发光检测分析。

背景技术

甲状腺球蛋白(Tg)是一分子量约为660kD的糖蛋白，在甲状腺主要激素如甲状腺素、三碘甲腺原氨酸的合成中起激素原的作用。在甲状腺瘤、亚急性甲状腺炎、桥本甲状腺炎和葛瑞夫氏病中，Tg的数目会增多；测量Tg的浓度水平有助于婴儿天生甲状腺机能减退症状的治疗。

目前测定Tg的方法有直接竞争固相放射免疫分析(RIA)和双抗体夹心免疫放射分析法(IMRA)或酶联免疫分析法(ELISA)，这些方法都会受到机体本身的甲状腺球蛋白自身抗体的干扰，而且放射免疫分析方法存在对操作人员有放射性危害、废弃物处理、产品保质期短、操作时间长等问题；酶联免疫分析法存在灵敏度较低，操作步骤繁琐，操作时间周期长，易造成结果假阳性或假阴性等问题。从而需要人们寻找一种更为安全、灵敏和可靠的免疫检测分析方法，而最近几年使用化学发光为检测技术的测定试剂盒开始初露端倪。

化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)于1977年问世，是把高灵敏的化学发光分析方法和特异性强的免疫分析方法相结合发展起来的一项具有化学发光分析的高灵敏度和免疫分析法的高选择性的新的免疫分析技术。1985年第一代化学发光免疫分析试剂盒研制成功并投放市场。进入九十年代，化学发光免疫分析试剂盒的研制和自动化测量仪的生产取得了突破性进展，从而进入高速发展阶段。化学发光免疫分析是继荧光、放射性同位素和酶免疫分析之后发展起来的一项新的免疫分析技术，根据大量的实验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及发展前景来看，在非放射性标记分析技术中化学发光免疫分析处于领先地位，代表了当今世界发展的方向和潮流，它不仅具有免疫反应的特异性，而且具有化学发光反应的高灵敏性(检测限可达10^-15-10^-18mol/L)。化学发光免疫分析技术具有灵敏度高、快速、准确、重复性好、效期长并安全无毒无污染等优点，成为取代放射免疫分析和酶免疫分析技术的首选。

本发明用高活性的酶标记抗体，以1，2-二氧乙烷类衍生物或鲁米诺、异鲁米诺及增强剂为发光底物，检测化学发光信号，其灵敏度远远高于酶联免疫方法中检测显色底物的吸光度的灵敏度。本发明既有效地利用了高特异的免疫方应，又使用了化学发光技术确保了检测的灵敏度，使用本试剂盒可以快速灵敏地检测血清样本中甲状腺球蛋白的含量，为临床诊断提供有价值的参考指标。

发明内容

首先，本发明提供了一种化学发光免疫分析测定甲状腺球蛋白的试剂盒。

本发明的试剂盒包括以下组分:甲状腺球蛋白校准品；甲状腺球蛋白抗体包被的固相载体；酶标记的甲状腺球蛋白抗体；化学发光底物液；以及浓缩洗涤液。

根据本发明的试剂盒，所述固相载体为微孔板、塑料珠或塑料管。

根据本发明的试剂盒，所述酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶，优选的所述酶为辣根过氧化物酶。

根据本发明的试剂盒，所述化学发光底物液的发光剂为1，2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺。

其次，本发明提供了制备上述试剂盒的方法。

其步骤如下:以甲状腺球蛋白纯品配制校准品；以甲状腺球蛋白抗体包被固相载体；制备酶标记的甲状腺球蛋白抗体；配制化学发光底物液；分装上述组分并组装为试剂盒。

根据本发明的方法，所述甲状腺球蛋白抗体包被固相载体的步骤包括以下步骤:采用0.020M pH值为4.2的磷酸缓冲液与适当浓度的甲状腺球蛋白抗体混合制成包被液，并将其负载于固相载体上，使用封闭液封闭。

配制封闭液为，1000mL所述封闭液中包含0.2g NaH₂PO₄·2H₂O、2.9gNaH₂PO₄·12H₂O、10g水解明胶和1mL生物防腐剂，pH值为7.0～7.6，然后将所得封闭液负载于上述固相载体上。

在上述方法中，所述固相载体为微孔板、塑料珠或塑料管，优选的，甲状腺球蛋白抗体包被的微孔板为96孔的微孔板条。

在上述方法中，所述酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶，优选的，所述酶为辣根过氧化物酶。

所述化学发光底物液的发光剂为1，2-二氧乙烷类衍生物或鲁米诺、异鲁米诺。