[发明专利]一种D－氨基酸氧化酶融合蛋白及其载体和应用

权利要求书

1. 一种D-氨基酸氧化酶融合蛋白，其特征在于由D-氨基酸氧化酶与透明颤菌血红蛋白融合而成，且具有D-氨基酸氧化酶活性和透明颤菌血红蛋白活性。

2. 按照权利要求1所述的D-氨基酸氧化酶融合蛋白，其特征在于其透明颤菌血红蛋白可以融合在D-氨基酸氧化酶的N-端或C端。

3. 按照权利要求1或2所述的D-氨基酸氧化酶融合蛋白，其特征在于由下述(a)或(b)所述的氨基酸序列组成：

(a)SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；

(b)在(a)的氨基酸序列中替换、添加或缺失1个或几个氨基酸的氨基酸序列，且该蛋白质具有D-氨基酸氧化酶活性。

4. 按照权利要求3所述的D-氨基酸氧化酶融合蛋白，其特征在于所述的D-氨基酸氧化酶融合蛋白的氨基酸序列的N-端或C-端携带有长度为6～12个的多聚氨基酸标签

5. 按照权利要求4所述的D-氨基酸氧化酶融合蛋白，其特征在于所述的多聚氨基酸标签在该融合蛋白的C-端。

6. 按照权利要求4所述的D-氨基酸氧化酶融合蛋白，其特征在于所述的多聚氨基酸是多聚组氨酸、多聚丝氨酸、或由组氨酸、丝氨酸、精氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、丙氨酸、甘氨酸、亮氨酸、脯氨酸等组成的混合多聚氨基酸。

7. 按照权利要求6所述的D-氨基酸氧化酶融合蛋白，其特征在于和所述的多聚氨基酸标签螯合的金属离子是镍离子、钴离子、铜离子、铅离子等。

8. 按照权利要求7所述的D-氨基酸氧化酶融合蛋白，其特征在于所述的多聚氨基酸标签是多聚组氨酸。

9. 按照权利要求8所述的D-氨基酸氧化酶融合蛋白，其特征在于该融合蛋白由SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列组成。

10. 编码权利要求3所述的D-氨基酸氧化酶融合蛋白的基因，其特征在于由下述(a)或(b)的DNA序列组成：

(a)SEQ ID NO：2所示的DNA序列；

(b)与(a)的DNA序列具有80％以上的同源性的DNA序列，且所编码的蛋白质具有D-氨基酸氧化酶活性。

11. 编码权利要求9所述的D-氨基酸氧化酶融合蛋白的基因，其特征在于由SEQ ID NO：4所示的DNA序列组成。

12. 含有权利要求10或11所述的D-氨基酸氧化酶融合蛋白基因的重组表达载体。

13. 含有权利要求10或11所述的D-氨基酸氧化酶融合蛋白基因的宿主菌。

14. 按照权利要求12所述的重组表达载体，其特征在于所述的表达载体是大肠杆菌诱导型或组成型表达载体。

15. 按照权利要求14所述的重组表达载体，其特征在于所述的表达载体是诱导型表达载体PET-VDAAO。

16. 按照权利要求13所述的宿主菌，其特征在于所述的宿主菌是E.coliBL21(DE3)或JM109等。

17. 权利要求3或4所述的D-氨基酸氧化酶融合蛋白在制备戊二酰基-7-氨基头孢烷酸上的应用。