[发明专利]一种乙型肝炎病毒cccDNA荧光定量检测方法和试剂盒

权利要求书

1、 一种乙型肝炎病毒cccDNA荧光定量检测方法，包括PCR扩增反应体系，其特征在于：该PCR体系包括上游引物、下游引物和探针，所述上游引物位置在HBV基因组核苷酸序列1520--1580，下游引物位置在HBV基因组核苷酸序列1920-2000；探针位置在HBV基因组核苷酸序列1850--1900，探针两端分别连接荧光基团和淬灭基团。

2、 根据权利要求1所述的方法，所述PCR的上游引物序列为：5’-cacctctctttacgcggtct-3’；下游引物序列为：5’-atacgggtcaatgtccatgc-3’；探针序列为：FAM TTCAAGCCTCCAAGCTGT 5NFQ。

3、 根据权利要求2所述的方法，所述PCR扩增反应体系为：10ng DNA样本，2μl10×dNTP和0.5U Taq DNA多聚酶，上、下游引物各25ng、探针25ng，总体积20μl。

4、 根据权利要求3所述的方法，PCR扩增反应条件为94℃预变性5min，94℃30s、60℃ 1min、72℃ 1min，循环35次，72℃延伸10min。

5、 根据权利要求3所述的方法，所述DNA样本来自血液或肝组织，模板总DNA浓度不低于5ng/μl。

6、 一种乙型肝炎病毒cccDNA荧光定量检测试剂盒，包括权利要求1或2所述的PCR扩增反应体系。

7、 根据权利要求6所述试剂盒，所述PCR扩增反应体系包括2μl 10×dNTP和0.5U TaqDNA多聚酶，上、下游引物、探针各25ng。

8、 根据权利要求7所述试剂盒，所述PCR扩增反应体系中检测的DNA样本来自血液或肝组织，模板总DNA浓度不低于5ng/μl。

9、 根据权利要求8所述试剂盒，所述PCR扩增反应条件为94℃预变性5min，94℃30s、60℃ 1min、72℃ 1min，循环35次，72℃延伸10min。