[发明专利]CpTI酶联免疫检测试剂盒、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种制备豇豆胰蛋白酶抑制剂蛋白的方法，其包括步骤：

制备豇豆胰蛋白酶抑制剂蛋白粗品：将豇豆种子浸泡3～4小时， 去掉种皮，4℃条件下用粉碎机粉碎，种子粉碎后，加入5～10倍豇豆 种子量的醋酸钠溶液搅拌提取12～18小时，单位为W/V，得粗提液； 将粗提液离心，取上清，用0℃的饱和度为60％的硫酸铵沉淀，离心， 保留沉淀，得豇豆胰蛋白酶抑制剂蛋白粗品；用亲和层析法纯化豇豆 胰蛋白酶抑制剂蛋白粗品，在亲和层析后进一步采用电泳分离；

所述亲和层析的方法是将豇豆蛋白酶抑制剂蛋白粗品用少量平 衡液溶解后，加入预平衡的色谱柱，经清洗后，洗脱得到豇豆胰蛋白 酶抑制剂蛋白，其中平衡液和冲洗液的配制为：50mM  Tris-HCl+0.01～0.1M CaCl₂，pH8.0；洗脱液的配制为：0.01～0.1M HCl+0.3M NaCl+0.01M CaCl₂；

所述亲和层析所用色谱柱的填料为CNBr-activated sepharose 4B。