[发明专利]从葵粕中提取绿原酸、分离蛋白和蛋白小肽的工艺

说明书

技术领域

本发明涉及葵粕的综合利用技术，特别是涉及一种从葵粕中提取绿原酸、分离蛋白和蛋白小肽的工艺。 

背景技术

葵粕就是葵花籽经剥壳萃取油后留下的残渣。葵粕的有效成分为含有绿原酸等物质的葵花蛋白和粗纤维。其中蛋白含量高达30％～48％，绿原酸含量为1％～3％。绿原酸是植物在有氧呼吸过程中形成的一种苯丙素类物质，具有利胆、抗菌、降压、增高白血球及兴奋中枢神经系统等多种药理作用，同时，还具有很强的抗氧化性，在化妆品、食品、医药领域都有很高的应用价值。 

中国专利：申请号200510047693.0提供了一种从葵粕中连续提取绿原酸及葵花蛋白的方法，该方法存在如下技术缺陷：1.采用盐水浸泡提取方法，这种提取方式对于盐水的温度和浓度要求非常高，否则容易造成葵粕中蛋白质变性影响浸出率，且浸出率很低；2.浸泡后的葵粕用胶体磨磨碎后直接分离，由于研磨后的物质为乳浊液，直接通过大孔树脂时将会堵塞树脂，影响吸附；3.洗脱液通过加热一定的时间去除其中所含的溶剂，这种方式会导致绿原酸氧化。 

现有技术中还有诸如《一种葵花粕中提取纯化绿原酸的方法》(申请号200510094347.8)等技术，但是这些技术大都采用搅拌提取或萃取的方式，溶媒用量大，提取成本高，且没有对葵粕中变性蛋白和结合蛋白进行分离提取，未能做到葵粕物尽其用。 

发明内容

本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种产品纯度高，收率高，生产成本低，且使葵粕资源得到充分利用的从葵粕中连续提取绿原酸、分离蛋白和蛋白小肽的工艺。 

本发明的具体工艺步骤如下： 

原料葵粕需用去壳油葵仁经6号溶剂油萃取葵花籽油后的葵粕，因为油葵壳外面是黑色的，葵壳色素影响分离蛋白和蛋白小肽的颜色。 

1、粉碎：选取葵仁萃取油后的葵粕，将其粉碎通过20～80目筛。 

2、渗漉：将葵粕粉装入渗漉器中。渗漉器的直径与高度比为1∶3～10，装料高度与渗漉器的直径比为2～8∶1，用渗漉液湿法装柱，渗漉液为用稳定剂调PH至4～5的40％～60％的乙醇水溶液，所述的稳定剂为抗坏血酸和乙酸的水溶液或者或者为抗坏血酸和磷酸的水溶液，其中抗坏血酸∶乙酸＝2∶3～4∶1，抗坏血酸∶磷酸＝2∶3～4∶1，上述混合酸与 水的比例为2∶1～1∶3。稳定剂可以起到防止绿原酸在提取过程中酚羟基氧化、烯酸酯键水解和相继分子内酯基迁移而发生异构。装料后浸泡3～15h，开始渗漉。流速为1/10-1BV/h，共收集6倍渗漉液，收集前1～4倍渗漉液提取绿原酸，5～6倍渗漉液套用作下批渗漉的湿法装柱用。渗漉后的葵粕提取分离蛋白用。 

3、减压浓缩：将上述1～4倍渗漉液进行减压浓缩(用旋转蒸发器)，回收乙醇至浓缩液无醇。 

4、聚酰胺柱层析：将处理好的50～200目聚酰胺用10％～50％乙醇湿法装柱，柱直径与高度比为1∶5～1∶30，装柱高度与直径比为5～10∶1，上样量浓缩液与聚酰胺的比为0.5～2∶1，洗脱剂为10％～50％乙醇水溶液，自然流速，收集3.5～16倍洗脱液。 

5、减压浓缩、结晶：将收集的3.5～16倍洗脱液进行减压浓缩回收乙醇至无醇，冰箱4℃冷藏结晶，分离晶体，分别用少量丙酮和乙酸乙酯洗涤晶体，真空干燥，即得到绿原酸成品。 

6、将3中渗漉后的葵粕加8～15倍水稀释，用10％～20％氢氧化钠液调PH8～10，加氯化钠5％～10％、40℃～55℃搅拌提取1～2h，渣液分离，渣生产蛋白小肽。所得清液用10％～20％盐酸溶液调至葵粕蛋白等电点PH4～5.5，离心分离得蛋白凝乳，凝乳用提取液等体积的调整PH4～5的纯水洗涤1～3次，用纯水将凝乳分散，使蛋白浓度达15％～25％，均质，喷雾干燥，得分离蛋白粉。 

7、将6中分出的渣，加8～15倍纯水稀释，用10～20％氢氧化钠液调PH8～10，加0.2％～0.4％(w/v)(每100毫升加入0.2～0.4克)葵粕不溶蛋白提取剂(宁夏银川索然生物科技研究中心研制)，水溶40℃～55℃提取1～2h，调整温度45℃～48℃，PH7.5，加2121复合蛋白酶(葵粕不溶蛋白和结合蛋白专用，宁夏银川索然生物科技研究中心研制、提供)0.2％～0.4％(w/v)(每100毫升加入0.2～0.4克)，搅拌酶解4～6h，85℃～90℃灭酶15分钟，渣液分离，渣作饲料用，液加2％～5％(w/v)活性炭脱色、脱炭、浓缩至固含量35％～55％，均质，喷雾干燥，得葵粕蛋白小肽。 

本发明同现有技术相比具有以下技术特点：