[发明专利]定量测定植物中草药提取成分中雌二醇含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及定量测定中草药提取成分中生化成分的方法，具体地 说是一种定量测定植物中草药提取成分中雌二醇含量的方法。

背景技术

沙棘叶中含有总黄酮，目前据相关文献报道，对于沙棘叶中总黄 酮的方法有紫外分光光度法、高效液相色谱法及荧光分析法。

经发明人的研究得知，沙棘叶中具有较高含量的雌二醇，这对应用沙棘叶 的提取物制作补充雌激素的药品与保健品具有重大意义。那么，研究分析不同 产地、不同采摘季节、不同批次等沙棘叶的雌二醇含量，对沙棘叶的开发利用 具有重要意义。

沙棘叶中含有较高量的雌二醇，是发明人的发现，目前，尚处于未公知状 态，人们对沙棘叶的分析还处在对总黄酮的分析阶段，没有深入到分析沙棘叶 中雌二醇的含量阶段。

雌二醇定量测定试剂盒(磁分离酶联免疫法)，用于定量测定人血清和血浆 中雌二醇的含量。磁分离酶联免疫法是酶联免疫系统与磁性微粒分离技术相结 合的一种测定法，并使用一种高亲和力的多克隆抗体。标本、质控品和标准品 中的E2与限量的荧光素标多克隆抗体结合，随后加入定量的酶标E2衍生物与 E2竞争结合；直接测定总E2的含量。

雌二醇定量测定试剂盒的批准文号为：国药准字S20060022。

截止目前，还没有发现将磁分离酶联免疫法用于测量中草药中的雌二醇含 量的相关报导。

发明人成功地应用雌二醇定量测定试剂盒说明书所提供的方法，将磁分离 酶联免疫法用于测量中草药中的雌二醇含量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测量数据准确、操作简便易行的定量 测定植物中草药提取成分中雌二醇含量的方法。

定量测定植物中草药提取成分中雌二醇含量的方法，应用雌二醇定量测定 试剂盒所提供的试剂，使用该试剂盒的使用说明书所提供磁分离酶联免疫法， 其特征是：将植物中草药提取液作为标本，按该试剂盒的使用说明书的步骤进 行操作。

具体按下述三步骤：a、第一次孵育-免疫反应，b、第二次孵育-酶反应， c、读取吸光值；

a、第一次孵育-免疫反应

a.1、吸取45ul各浓度标准品、质控品、标本，加之标记好的相应试管的底部；

a.2、加60ulE2抗试剂至各试管，混匀；

a.3、试管连架置37℃水浴20分钟；

a.4、加60ul E2衍生物至各试管，混匀；

a.5、试管连架置37℃水浴20分钟；

a.6、加60ul磁分离试剂至各试管，混匀；

a.7、试管连架置37℃水浴5分钟；

a.8、试管连架放入磁分离器，磁场中沉淀2分钟，确保每支试管底部都与分离 器表面接触；

a.9、用一大而缓慢的圆周运动倒转分离器，倒出上清液，把倒转的试管放在滤 纸上，用强有力的动作拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；

a.10、放正分离器，加150ul稀释后的清洗液至各试管；

a.11、放至涡旋机，激烈振荡，彻底混匀；

a.12、试管连架放人磁分离器，磁场中沉淀2分钟；确保每支试管底部都与分 离器表面接触；

a.13、用一大而缓慢的圆周运动倒转分离器，倒出上清液，把倒转的试管放在 滤纸上，用强有力的动作拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；

a.14、重复a.10-a.13步骤两次；

b、第二次孵育-酶反应

b.1、为磁分离免疫测定仪校零，准备1支空白试管，做好标记，放置试管架上；

b.2、从分离器取出试管架，加90ul基质至各试管，包括空白管；彻底混匀；

b.3、试管连架置37℃水浴30分钟；

b.4、加300ul终止液至各试管，包括空白管，其顺序与加基质顺序相同；

b.5、把试管架放人磁分离器，沉淀时间不少于10分钟；

c、读取吸光值

用空白管在550nm校零；在550nm、492nm读取标准品、质控品、标本的吸 光值。