[发明专利]聚乙二醇化重组人干扰素ω偶合物

说明书

技术领域

涉及一种治疗对干扰素ω敏感的病毒感染的药物制剂，尤其是一种能够明显减少用药次数，具有长效作用的聚乙二醇化重组人干扰素偶合物以及其制备工艺。

背景技术

干扰素是一类天然存在的小分子蛋白质和糖蛋白，它们通过大多数有核细胞对病毒感染以及其他抗原刺激的反应而产生和分泌。干扰素使细胞能抵抗病毒感染并对细胞表现出广泛的作用。它们通过与细胞表面的特异性膜受体结合而发挥其细胞活性。

慢性肝炎主要指慢性乙型肝炎和慢性丙型肝炎，两种肝炎在我国都很常见，尤其是慢性乙型肝炎。如果不进行有效地抗病毒治疗，部分慢性肝炎的病人最终将发展为肝硬化和肝癌。药物经济学分析表明，治疗慢性肝炎引起的肝硬化或肝癌的成本，远远高于早期阶段的抗病毒治疗所需要的成本。

干扰素a是治疗慢性乙型肝炎或慢性丙型肝炎的首选药物，可以有效地抑制或清除病毒，疗效持久，阻止肝硬化或肝癌的发生。但普通干扰素治疗具有自身不可克服的缺点，半衰期短，只有4个小时。所以，干扰素不得不每隔一天就注射一次，使用很不方便。另外，注射干扰素的宿主可产生针对干扰素的抗体。该反应可引起类似于流感的症状，这种症状被作为干扰素的副作用进行报道；同时该反应还可引起对干扰素的破坏，从而需要更大剂量干扰素以达到治疗效果。

为了解决普通干扰素在临床治疗上的不足，多家生物制药公司致力于开发长效的干扰素。其手段是通过对普通干扰素进行聚乙二醇修饰。

聚乙二醇(Poly ethlene glycol，pEG)是一种无毒、无免疫原性的水溶性高分子物质，可以通过共价件键结合方式修饰蛋白质。聚乙二醇修饰蛋白质药物不仅可以降低免疫原性和毒性、而且能明显延长血浆半衰期，提高蛋白质药物的稳定性。

临床上，广泛应用的聚乙二醇化干扰素包括先灵葆雅公司的开发的聚乙二醇化干扰素α-2b(商品名，佩乐能，PegIntron)；罗氏公司开发的聚乙二醇化干扰素α-2a(商品名，派罗欣，PegasyS)，通过与利巴韦林联合广泛用于慢性乙型和丙型肝炎的治疗。

本发明提供了一种聚乙二醇分子与重组人干扰素ω的N末端结合，且一个重组人干扰素ω分子结合一个聚乙二醇分子的聚乙二醇化重组人干扰素ω药物的制备方法。

发明内容

本发明所要解决的首要技术课题是提供一种有利于工业化生产、且能明显减少用药次数、用于慢性肝炎临床治疗的聚乙二醇化重组人干扰素药物。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种聚乙二醇化重组人干扰素ω药物，其特征在于：聚乙二醇化重组人干扰素药物是由聚乙二醇和重组人干扰素ω以共价键连接。

所述的聚乙二醇化重组人干扰素药物是由聚乙二醇和重组人干扰素ω的N末端通过共价键连接。

每个聚乙二醇分子连接一个重组人干扰素ω分子。

所述的聚乙二醇是单甲氧基聚乙二醇(Monomethoxy polyethyleneglycol，mPEG)活化分子，包括单甲氧基聚乙二醇丁醛、单甲氧基聚乙二醇丙醛(mPEG-ALD)和Y型聚乙二醇乙醛，其分子量在5000-40000之间；最优选的是单甲氧基聚乙二醇丙醛(mPEG-ALD)。

聚乙二醇与重组人干扰素发生共价结合反应的比例(摩尔比)约0.25～20，优选比例在2.5～10之间。

本发明所要解决的再一个技术课题是提供一种上述聚乙二醇化重组人干扰素药物的生产工艺。

包括以下过程：

1)提供pH 4.0～9.0、100mmol/L的盐浓度的缓冲体系；

2)在提供的缓冲体系中依次加入适量重组人干扰素ω，聚乙二醇和NaBH3CN；

3)上述混合物在4～37℃，反应12～72小时；

4)步骤3)反应得到的产物进行SDS-PAGE分析，确定修饰的程度；

5)用20mM pH5.0的醋酸缓冲液透析或者稀释反应混合物，上CM阳离子交换柱，用含有0-1M NaCl的20mM pH5.0的醋酸缓冲液梯度洗脱，280nm监测洗脱峰；

6)SDS-PAGE分析洗脱峰，收集主要含一个聚乙二醇分子连接一个重组人干扰素分子的单点修饰洗脱峰；

7)将单点修饰洗脱峰用超滤离心管进行浓缩处理后，冷冻干燥。

与现有技术相比，本发明所具备的突出的实质性特点和显著的技术进步。

主要表现在以下3个方面：

本发明所提供的聚乙二醇化重组人干扰素-ω药物的优点是提供在体内更长时间的血液水平，具有明显的长效性，减少注射次数而使患者容易接受；