[发明专利]提取、纯化靶核酸的方法及其应用

权利要求书

1.一种靶核酸的提取方法，包括利用标记物B特异结合物A和标记物B，将用标记物B标记的捕获核酸和样品中的靶核酸结合到结合有标记物B特异结合物A的固相载体上形成固相载体-A-B的捕获核酸-靶核酸复合物的过程；所述捕获核酸至少包括与RNA靶核酸特异结合的用标记物B标记的2’-氧-甲基化寡核酸，还包括至少一种与DNA靶核酸特异结合的用标记物B标记的2’-脱氧寡核酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述标记物B为Biotin，所述标记物B特异结合物A为Strepavidin。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述靶核酸的提取方法包括以下步骤：

(1)制备至少一种带有Biotin标记的特异于一种RNA靶核酸的捕获核酸R；

(2)将至少一种捕获核酸R加入待测样品，得到Biotin标记的捕获核酸-靶核酸复合物，或多种复合物的混合物；

(3)将固定有Strepavidin的固相载体加入待测样品，形成固相载体-Strepavidin-Biotin标记的捕获核酸-靶核酸RNA复合物，或连设在同一固相载体上的多个所述复合物的混合物，得到含有靶核酸的目标物。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中还需制备至少一种带有Biotin标记的特异于一种DNA靶核酸的捕获核酸；步骤(2)中还需将至少一种带有Biotin标记的特异于DNA靶核酸的捕获核酸加入待测样品；步骤(3)中得到的含有靶核酸的目标物中含有分别与捕获核酸一一对应的RNA和DNA靶核酸。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述标记物B为10-40Oligo-dA，所述标记物B特异结合物A为10-40Oligo-dT。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述靶核酸的提取方法包括以下步骤：

(1)制备至少一种3’端带有10-40Oligo-dA标记的特异于一种RNA靶核酸的捕获核酸R’；

(2)将至少一种捕获核酸R’加入待测样品，得到3’端带有10-40Oligo-dA的捕获核酸-靶核酸复合物，或多种复合物的混合物；

(3)将固定有10-40Oligo-dT寡核酸的固相载体加入待测样品，形成固相载体-dT-dA标记的捕获核酸-靶核酸复合物，或连设在同一固相载体上的多个所述复合物的混合物，得到含有靶核酸的目标物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中还需制备至少一种3’端带有10-40Oligo-dA标记的特异于一种DNA靶核酸的捕获核酸；步骤(2)中还需将至少一种3’端带有10-40Oligo-dA标记的特异于DNA靶核酸的捕获核酸加入待测样品；步骤(3)中得到的含有靶核酸的目标物中含有分别与捕获核酸一一对应的靶核酸RNA和DNA。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：将捕获核酸3’端的10-40Oligo-dA替换为10-40Oligo-dC、10-40polyA或其它长度为10-40碱基对的寡核酸；将共价结合于固相载体上的寡核酸相对应地替换为与10-40Oligo-dC互补的10-40Oligo-dG、与10-40polyA互补的10-40polyT或与捕获核酸3’端序列互补的其它长度为10-40碱基对的寡核酸。

9.根据权利要求1-8任一所述的方法，其特征在于：还包括对得到的目标产物固相载体-A-B的捕获核酸-靶核酸复合物进行洗涤的步骤。

10.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于：所述固相载体上的标记物B特异结合物A和标记物B结合的条件及反应体系，捕获核酸和靶核酸的结合条件及反应体系，以及形成固相载体-A-B的捕获核酸-靶核酸复合物的条件及反应体系相同，反应体系均为：0.1-2％ NP-40，pH 5.0-8.0 10-200mM Tris，0.1-2％ TritonX-100，0.01-1％ SDS；反应条件均为：在55-90℃下温育2-30分钟，然后在室温下放置2-30分钟。

11.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于：所述固相载体为直径0.05-5μm的超顺磁材料磁珠。

12.用权利要求1-11任一项所述方法获取的含有靶核酸的目标物。