[发明专利]一种钩端螺旋体属特异性抗体胶体金快速检测试纸条

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及钩端螺旋体属特异性抗体检 测试纸条及其应用。

背景技术

钩端螺旋体病是由致病性钩端螺旋体(简称钩体)所引起的急性 传染病。鼠类、猪及其它家畜为主要传染源。钩体随带菌动物尿排出， 污染水源，人在接触疫水时，通过皮肤、粘膜而感染。发病多在夏秋 割稻季节或在大雨洪水之后。人感染钩体病后，潜伏期多在1～3周。 首先形成败血症，可有多种临床表现，包括普通型、肺出血型、黄疸 出血型、脑膜脑炎型。约在发病1周左右，发病，进入免疫反应期， 表现诸多神经症状。其诊断除依据流行病学及临床症状外，实验室检 测是必不可少的，其涉及到的特异性检测有：

1.病原体分离

钩体不易着色，一般显微镜很难观察到，必须采用黑底映光法直 接查找钩体。在发病10天内可从血液及脑脊液中分离出钩体。第二 周尿中可检出钩体。钩体从体液或组织中分离需要特殊的实验室技术 和培养基。

最近用超速离心集菌后直接镜检法、荧光抗体染色法、原血片镀 银染色法及甲苯蓝染色等方法直接检查病原体，可达到快速诊断目 的，阳性率在50％左右，有助于早期诊断。

动物接种是一种分离病原体的可靠方法，将患者的血液或其他体 液接种于动物(幼年豚鼠和金黄地鼠)腹腔内，晚期病例可用尿液接 种于动物腹部皮下。接种3～5天，用暗视野检查腹腔液，亦可在接 种3～6天时取心血检查。动物接种的阳性率较高，但所需时间较长， 所需费用大。

2.血清学试验

(1)凝集溶价试验(凝溶试验)：有较高的特异性和敏感性，但需 不同型别活菌操作，凝集素一般在病后7～8天出现，逐渐升高，以 超过1∶400效价为阳性，可持续数月到数年。间隔两周双份血清， 效价增高4倍以上为阳性。

(2)酶联免疫吸附试验(ELISA)：比凝溶试验阳性出现时间更早 和更灵敏。发现显微镜凝集试验与ELISA的总符合率达86.2％。近年 来国外已普遍采用钩体IgM抗体技术，有高度特异性。

(3)间接红细胞凝集试验：将从钩体菌体中提取的一种抗原成分， 将其吸附于人“O”型红细胞表面致敏，遇到同种抗体，即发生红细胞 凝集现象，本试验具钩体感染的属特异性而无群或型的特异性，较凝 溶试验阳性出现早，操作简便，不需特殊设备，适合基层推广应用。

(4)间接红细胞溶解试验：用钩体抗原物质将新鲜绵羊红细胞致 敏，在补体存在的条件下与含有抗体的血清混合时发生溶血，较间接 红细胞凝集试验的灵敏性为高。

(5)间接荧光抗体法：此法是将标准钩体菌株作成涂片，然后将 检测病人的血清滴在已知菌株的玻片上，经洗涤，如病人血清中具有 抗体，抗原抗体结合，再用抗人球蛋白荧光抗体与此复合物结合，发 生荧光，即为阳性，此法无型特异法。本法检出抗体时间及阴转时间 均较显凝试验抗体为早，具有一定的早期诊断意义。

上述各项检测，均是用已知钩体抗原检测血中出现的相应抗体， 不能做到早期诊断。近年来开展了乳胶凝集抑制试验，反向间接血凝 试验与间接荧光抗体染色试验等可以测出血中早期存在的钩体，已取 得了早期诊断的初步成果。

3.其它诊断

(1)钩端螺旋体DNA探针技术：早已应用于临床，schoone等1984 年证实，用黄疸出血群哥本哈根型Wijnberg株DNA制备探针，可在 硝酸纤维素滤膜上检出2pg的同源DNA。且致病性钩体不同血清群 Patoc I株呈交义杂交现象。作者认为DNA探针杂交技术是一种敏感 性高的早期诊断方法。

(2)DNA基因扩增技术：聚合酶链反应(PCR)的DNA扩增技术 目前已引入钩体病的诊断领域。因PCR只要有引物便可进行试验， 且方法简便，并适用于大数量标本的流行病学调查。VanEys等1989 年用PCR扩增技术对哈焦型钩体感染的牛尿作了检测研究，提出 PCR DNA扩增技术完全可作钩体病诊断的一个新型方法。

4.钩端螺旋体膜蛋白的研究：已有研究证明，ompL1和Lip32是 钩端螺旋体的主要膜蛋白，特别是Lip32是已知膜蛋白中含量最高的。 ELISA研究证实，ompL1和Lip32在感染动物的体内有大量的表达， 均具有良好的免疫原性。

发明内容