[发明专利]胚胎干细胞样多能性细胞及其制备方法有效
| 申请号： | 200810114901.8 | 申请日： | 2008-06-13 |
| 公开（公告）号： | CN101603025A | 公开（公告）日： | 2009-12-16 |
| 发明（设计）人： | 周琪;王柳;郝捷;范勇;李雪梅 | 申请（专利权）人： | 北京华盛兴邦生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/06 | 分类号： | C12N5/06 |
| 代理公司： | 北京康信知识产权代理有限责任公司 | 代理人： | 李丙林 |
| 地址： | 100086北京市海淀区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胚胎 干细胞 多能 细胞 及其 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种诱导小鼠体细胞产生小鼠胚胎干细胞(ES)样多能性细胞的方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：1)小鼠体细胞的制备；2)ES细胞提取物的制备；以及3)利用所述ES细胞提取物处理所述小鼠体细胞，
其中，所述小鼠体细胞选自小鼠尾尖成纤维细胞、小鼠OCT4-GFP的成纤维细胞、小鼠心脏间充质细胞构成的组，
所述ES细胞提取物为小鼠ES细胞提取物，
在利用所述ES细胞提取物处理所述小鼠体细胞的步骤中使用显微注射方法，
在所述ES细胞提取物的制备的所述步骤中，培养的所述ES细胞经0.05％胰蛋白酶消化离心后，用PBS和Lysis缓冲液洗所述ES细胞，再用所述Lysis缓冲液重悬沉淀，用超声波细胞破碎仪破碎所述ES细胞，离心后取上层液体冻存。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在利用所述ES细胞提取物处理所述小鼠体细胞的所述步骤中，将所述小鼠体细胞接种到玻片上，此时所述小鼠体细胞刚贴壁伸展稍许，把所述玻片转移到含有hepes的胚胎干细胞培养液进行注射，在所述注射之后用ES的培养液在37℃、5％CO2条件下培养获得所述ES样多能性细胞。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进行所述注射时所用的注射针直径是0.5μm。
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