[发明专利]一种提取蔷薇科植物根原生质体的方法

权利要求书

1、一种提取蔷薇科植物根原生质体的方法，是将蔷薇科植物根先用酶解液I进行酶解，再用酶解液II进行酶解，得到蔷薇科植物根原生质体；所述酶解液I为含有210-420U/ml纤维素酶的溶液，所述酶解液II为含有80-320U/ml纤维素酶和1-4U/ml果胶酶的溶液。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶解液I为含有280U/ml纤维素酶的溶液，所述酶解液II为含有240U/ml纤维素酶和2U/ml果胶酶的溶液。

3、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述酶解液I和酶解液II均用含0.5-4mmol/LCaCl₂，0.5-2mmol/L MgCl₂，0.05-0.25mg/mL牛血清白蛋白，0.022-0.055mg/mL抗坏血酸，0.25-1mg/mL聚乙烯吡咯烷酮的水溶液进行配制。

4、根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于：所述酶解液I和酶解液II均用含2mmol/LCaCl₂，1mmol/L MgCl₂，0.05mg/mL牛血清白蛋白，0.044mg/mL抗坏血酸，0.5mg/mL聚乙烯吡咯烷酮的水溶液进行配制。

5、根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述方法中，用所述酶解液I和所述酶解液II进行酶解的温度为24-26℃，用所述酶解液I进行酶解的时间为40-60分钟；用所述酶解液II进行酶解的时间为80-120分钟。

6、根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述酶解在转速为100-200r/min的震荡条件下进行，旋转半径为50mm或25mm。

7、根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述蔷薇科植物根在酶解前先切成0.5mm-1mm的小段。

8、根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：所述蔷薇科植物根与所述酶解液I中的所述纤维素酶的配比为(2100-5600)U纤维素酶/g根，优选为(2100-4200)U纤维素酶/g根；所述蔷薇科植物根与所述酶解液II中的所述纤维素酶和所述果胶酶的配比为(800-4800)U纤维素酶/g根和(10-40)U果胶酶/g根，优选为(800-3200)U纤维素酶/g根。

9、根据权利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于：所述蔷薇科植物根是蔷薇科植物的白色幼嫩初生根，优选为通过组织培养得到的。

10、根据权利要求1-9中任一所述的方法，其特征在于：所述蔷薇科植物为苹果属、梨属、桃属、杏属、李属或樱属植物；优选为珠美海棠(Malus zumi Mats)和山定子[Malus baccata(L.)Borkh]。