[发明专利]一种葡激酶及其表达载体

权利要求书

1.一种葡激酶，其特征在于是由SEQ ID No：1所示的氨基酸序列组成的多肽。

2.编码权利要求1所述葡激酶的基因，其特征在于由SEQ ID No：2所示的DNA序列组成。

3.含有权利要求2所述葡激酶基因的重组表达载体。

4.按照权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于所述的载体是指pBV220、pET17、pET15或pET28。

5.含有权利要求2所述葡激酶基因的宿主菌。

6.按照权利要求5所述的宿主菌，其特征在于所述的宿主菌是指E.coliBL21、E.coliDH5α、E.coliHB101、E.coliJM109或E.coliJM103。

7.含有权利要求2所述葡激酶基因的重组表达载体的构建方法，具体包括如下步骤：

(1)、以金黄色葡萄球菌1.1476的总DNA为模板，以P1和P2为引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；所述引物为：

P1：5′GGAATTCAAATGTGAAGTTCATTCGACAAAGGA 3′

P2：5′CGGGATCCTTATTTCTTTTCTATAAGAAC 3′

(2)、将步骤(1)所得PCR扩增产物和pUC18质粒分别用EcoRI和BamHI进行双酶切，然后用T4连接酶将所得酶切后的扩增产物与酶切后的pUC18连接，得连接产物；将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆，进行序列分析；挑选序列正确的克隆提取质粒，获得含有SAK基因的pUC18重组质粒；

(3)、用EcoRI和BamHI双酶切步骤(2)所得的pUC18重组质粒和pBV220质粒，然后用T4连接酶将酶切后的pUC18重组质粒中的SAK基因与pBV220质粒连接，得到连接产物；连接产物转化大肠杆菌BL21感受态细胞，筛选阳性克隆，得到含有SAK基因的工程菌株BL21。