[发明专利]一种橡胶树花药愈伤组织玻璃化超低温保存方法

权利要求书

1.一种橡胶树花药愈伤组织的玻璃化超低温保存方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)预培养：将花药愈伤组织接种到预培养基中，暗培养2～3天，培养温度为25～28℃；

2)装载：然后在室温下用60％的玻璃化溶液处理花药愈伤组织10～30分钟；

3)脱水及冻存：脱水处理后，在0℃下用玻璃化溶液处理20～40分钟，并去除玻璃化溶液，最后再重新加入玻璃化溶液，于液氮中保存；

所述预培养基为改良MS培养基中添加2，4-二氯苯氧乙酸1.0～3.0mg/L、6-糠氨基嘌呤1.0～3.0mg/L、萘乙酸1.0～3.0mg/L、植物凝胶2.0～3.0g/L、蔗糖50.0～90.0g/L、二甲基亚砜5～10％；所述60％的玻璃化溶液为：含34.2～68.4g/L蔗糖的愈伤组织继代液体培养基与玻璃化溶液按体积比40∶60配制而成，所述继代液体培养基为改良MS培养基中添加2，4-二氯苯氧乙酸1.0～3.0mg/L、6-糠氨基嘌呤1.0～3.0mg/L、萘乙酸1.0～3.0mg/L、蔗糖34.2～68.4g/L、椰子水40～90ml/L。

2.一种采用权利要求1所述方法保存的橡胶树花药愈伤组织的复苏及再培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

将液氮中保存的橡胶树花药愈伤组织于40℃水浴中浸泡2～3分钟，然后用洗涤液洗2次，每次10～12分钟；洗涤后，转移到愈伤组织继代培养基上，在25～28℃进行暗培养2～3天；再继代培养一次，培养20～30天后存活的花药愈伤组织开始生长；再继代一次，相同条件下培养40～60天；

所述洗涤液为改良MS培养基中附加2，4-二氯苯氧乙酸1.0～3.0mg/L、6-糠氨基嘌呤1.0～3.0mg/L、萘乙酸1.0～3.0mg/L、蔗糖342.3～410.8g/L；

所述继代培养基为改良MS培养基中添加2，4-二氯苯氧乙酸1.0～3.0mg/L、6-糠氨基嘌呤1.0～3.0mg/L、萘乙酸1.0～3.0mg/L、植物凝胶2～3g/L、蔗糖50.0～90.0g/L、椰子水40～90ml/L。