[发明专利]一种抗氧化活性虫草多糖的提取方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种抗氧化活性虫草多糖的提取方法，尤其是一种以虫草菌蝙蝠蛾拟青霉(Paecilonyces hepialid chen &Dai Cs-4)发酵废液为原料提取抗氧化活性虫草多糖的方法。

(二)背景技术

目前世界上已发现虫草属真菌350多种，其中我国记录有70余种。野生的冬虫夏草主要产于四川、西藏、云南、青海等海拔3000m以上的寒冷地带，由于其生长条件的限制及过度采挖，产量很低，所以价格昂贵。近年来，随着人们逐渐发现和认识虫草的滋补疗效和提高人体免疫功能，虫草的开发利用备受世人的极大关注，对虫草的研究有了突飞猛进的发展。虫草多糖是一类高分子复合物，它作为虫草的主要活性成分之一，是虫草中含量最高的药理活性物质。从1977年开始，日本和中国的科技工作者开展了对虫草多糖的研究工作，目前已经在天然冬虫夏草以及人工培育的虫草真菌中分别分离纯化出多种多糖组分，并对其理化性质和药理活性进行了研究。虽然已有的研究报道在所用虫草菌丝体原料上存在着差异，以及分离纯化的多糖产品各不相同，但都从不同角度肯定了虫草多糖的免疫调节及抑制肿瘤等功能。虫草多糖被认为是当前世界上非常好的免疫促进剂之一。因此，虫草多糖作为保健食品和医药产品有着广泛的开发前景。

深层发酵技术问世以后，人工虫草菌丝的产量问题得到了解决。在目前的工业化生产中，虫草发酵废液作为副产物，普遍被舍弃，不仅污染了环境，也是一种资源浪费，造成了虫草的主要生物活性物质——虫草多糖的大量损失。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种抗氧化活性虫草多糖的提取方法，尤其是一种以虫草菌蝙蝠蛾拟青霉(Paecilonyces hepialid chen &Dai Cs-4)发酵废液为原料提取抗氧化活性虫草多糖的方法，充分利用现行生产工艺中直接排放的发酵废液，提高利用率。

本发明采用的技术方案是：

一种抗氧化活性虫草多糖的提取方法，所述方法包括：

(1)以含有抗氧化活性虫草多糖的蝙蝠蛾拟青霉(Paecilonyceshepialid chen &Dai Cs-4)发酵废液为原料，离心取上清液；

(2)将步骤(1)所得上清液调pH至4.5～5.0，加入2～5倍体积的50％～100％(V/V)乙醇(浓度100％时即为无水乙醇)，沉淀20～60min，离心，取沉淀物；

(3)将步骤(2)所得沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，烘干，得到含有抗氧化活性虫草多糖的粗多糖粉末。

本发明中所述含有抗氧化活性虫草多糖的溶液为虫草菌发酵废液，为虫草菌蝙蝠蛾拟青霉(Paecilonyces hepialid chen &Dai Cs-4)经发酵获得的发酵液去除菌丝体后的液体成分，可解决当今虫草发酵液利用不充分和易造成环境污染等问题，提高了发酵废液的利用率，增加经济收益。

所述粗多糖粉末可直接应用于保健食品和医药领域，也可按照常规方法进一步纯化后应用于制备保健食品和药物。本发明中，为提高虫草多糖品质，所述含有抗氧化活性虫草多糖的粉末可进一步经复溶去除不溶物，酶解去除蛋白，脱色，透析去除小分子杂质，最后以乙醇沉淀，得到所述抗氧化活性虫草多糖。

具体的，所述方法按如下顺序步骤进行：

(1)将总糖含量为13～15g/L的虫草菌发酵废液浓缩至原体积的1/20～1/30得浓缩液1，4500r/min离心10min，取上清液；

(2)步骤(1)上清液调pH至4.5～5.0，加入2～5倍体积的50％～100％(V/V)乙醇，沉淀20～30min，4500r/min离心15min，取沉淀物；

(3)步骤(2)沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，60℃烘干，得到含有抗氧化活性虫草多糖的粗多糖粉末；

(4)将步骤(3)粗多糖粉末以50～100倍质量的蒸馏水溶解，调pH7.0～7.5，4500r/min离心5min去除不溶物，取上清液；

(5)取步骤(4)上清液，加入质量为粗多糖粉末质量50～100倍的蒸馏水，调pH为7.0～8.0，按4～6×10⁵U/g粗多糖的添加量加入胰蛋白酶，37℃保温酶解24h，4500r/min离心5min，取上清液，加入体积为上清液1/4的Sevag试剂(氯仿：正丁醇＝4:1，体积比)，15～25℃振荡30min，4500r/min离心20min，取上层液体蒸馏去除有机溶剂，得含有多糖的溶液；