[发明专利]PolyLyse-HSP70融合蛋白膜修饰的肠癌细胞瘤苗及其制备方法

权利要求书

1.一种聚赖氨酸-热休克蛋白70(PolyLyse-HSP70)融合蛋白膜修饰的肠癌细胞瘤苗，所述肠癌细胞瘤苗为跨膜表达PolyLyse-HSP70融合蛋白的CT26肠癌细胞的灭活细胞，所述融合蛋白的PolyLyse端嵌入肠癌细胞细胞膜、HSP70端游离在肠癌细胞膜之外；所述PolyLyse为长度为60～100个多聚赖氨酸肽段。

2.如权利要求1所述的肠癌细胞瘤苗，其特征在于所述PolyLyse为长度为60个的多聚赖氨酸肽段。

3.如权利要求2所述的肠癌细胞瘤苗，其特征在于所述PolyLyse肽段与HSP70之间插入有3～5个丙氨酸。

4.如权利要求1所述的肠癌细胞瘤苗，其特征在于所述肠癌细胞瘤苗为跨膜表达PolyLyse-HSP70融合蛋白的CT26肠癌细胞的灭活细胞，所述跨膜表达PolyLyse-HSP70融合蛋白的CT26肠癌细胞，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，430072，保藏日期：2008年6月25日，保藏编号CCTCC NO：C200826。

5.制备如权利要求1～3之一所述肠癌细胞瘤苗的方法，所述方法包括：以跨膜型融合基因修饰肠癌细胞，使肠癌细胞跨膜表达PolyLyse-HSP70融合蛋白，所述融合蛋白的PolyLyse端嵌入肠癌细胞细胞膜、HSP70端游离在肠癌细胞膜之外，筛选阳性克隆，灭活细胞，得到所述肠癌细胞瘤苗。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述方法为：以跨膜型融合基因修饰肠癌细胞，使肠癌细胞跨膜表达PolyLyse-HSP70融合蛋白，所述融合蛋白的PolyLyse端嵌入肠癌细胞细胞膜、HSP70端游离在肠癌细胞膜之外，筛选阳性克隆用化疗药模拟临床治疗进行处理，处理后的存活的细胞用丝裂霉素灭活，得到所述肠癌细胞瘤苗。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于所述化疗药为氟尿嘧啶，用量为0.01mg/mL细胞悬液。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述方法为：克隆HSP70基因的全长cDNA，将HSP70基因定向克隆接入真核表达载体pDisplay中，得到膜表达载体pDisplay-HSP70，在载体pDisplay-HSP70中的HSP70基因粘端连接编码4个丙氨酸和60个赖氨酸的DNA片段，得到融合蛋白膜表达载体pDisplay-mPolyLyse-HSP70，将载体pDisplay-mPolyLyse-HSP70转染肠癌CT26细胞，G418筛选阳性克隆，扩增后，以每毫升细胞悬液加入0.01mg5-氟尿嘧啶的量进行模拟临床化疗处理，5-氟尿嘧啶处理后存活的CT26细胞以丝裂霉素灭活，得到所述肠癌细胞瘤苗。