[发明专利]含微粉化人血管内皮抑制素的药物组合物

说明书

技术领域

本发明涉及含有微粉化固体形式的人血管内皮抑制素药物组合物，尤其涉及一种活 性保持良好的人血管内皮抑制素药物组合物的制备方法。

背景技术

研究发现，实体瘤在生长和转移过程中，需要血管的生成来提供营养，此时肿瘤细 胞会发出一些信号来促进血管向肿瘤组织增生，一些内源性血管生成抑制因子如 Angiostatin、Endostatin能够阻碍血管在肿瘤组织中的生长，使肿瘤的生长和转移处于停 滞(O’Relly，M.S.，et al.Cell.79：315-328，1994；O’Relly，M.S.，et al Cell.88：277-285， 1997)，美国哈佛医学院的Folkman教授在上世纪七十年代提出了用血管内皮抑素 (Endostatin)来抑制肿瘤生长的“饿死肿瘤疗法”理论。但由于Endostatin在表达制备过 程中存在着易于沉淀和复性困难等问题，限制了其在肿瘤患者中的大规模应用。

罗永章教授等人通过修饰人血管内皮抑制素的核苷酸编码序列，生产出N末端带 有9个附加氨基酸序列的重组人血管内皮抑制素(取名为：Endostar，中文名：恩度) (ZL 00107569.1)，其氨基酸序列为：

(M)GGSHHHHHHSHRDFQPVLHLVALNSPLSGGMRGIRGADFQCFQQARAVGL AGTFRAFLSSRLQDLYSIVRRADRAAVPIVNLKDELLFPSWEALFSGSEGPLKPGARIF SFDGKDVLRHPTWPQKSVWHGSDPNGRRLTESYCETWRTEAPSATGQASSLLGGRLL GQSAASCHHAYIVLCIENSFMTASK，其中当由大肠杆菌表达时其N末端的Met有时 会被部分删除。

重组的人血管内皮抑制素恩度保持内源性Endostatin的所有生物活性，同时解决了 Endostatin在生产过程中的难题，纯化过程简单，纯度高，活性保存好，其注射液已经 上市销售，临床上联合NP化疗方案用于非小细胞肺癌患者。

重组的的人血管内皮抑制素作为外源性蛋白，在体内很容易被免疫系统识别，进而 被降解，因此体内半衰期很短，患者需要频繁注射，临床顺应性很差。以乳酸-羟基乙 酸聚合物为基质的生物可降解微球在上世纪八十年代已经被利用于多肽药物的注射用 缓释制剂，例如如Takeda公司的Lupron Depot，瑞士Debiopharm公司的Trelstar Depot 和Novartis公司的Sandostatin Depot等。多肽药物在肌肉或皮下随着聚合物材料不断的 生物降解缓慢释放到体内，在较长时间里维持体内有效的血药浓度，释放周期从一周到 6个月不等，对于需要长期或终身给药的疾病，病人的顺应性大大提高。随着分子生物 学的发展，越来越多的大分子蛋白质药物也需要借助这一缓释平台来克服药物本身的缺 陷。

缓释微球制剂一般采用水包油包水的方法制备，蛋白质药物先存在于内水相中，与 含有乳酸-羟基乙酸聚合物的有机溶剂在高速剪切或超声的作用下形成初乳，再分散到 外水相中。蛋白质在油水界面上受到张力的影响，结构很容易发生改变，导致其生物学 活性的丧失。而固态的蛋白质则不受油水界面的影响，其在制备中可很好的保持活性， 因此，将蛋白固态化现正成为制剂研发的热点，然而，现有的生产固态蛋白的技术无法 生产出粒径小于3um的微粉化蛋白，故不能满足一些新剂型研发的需要，比如粒径较小 的微球。现有微粉化蛋白的方法已经有很多，总体归纳可分为以下几种：喷雾干燥法、 冷冻干燥法、喷雾冷冻干燥法、超临界流体技术。喷雾干燥是利用雾化器将药物溶液分 散为细小的雾滴，并在热干燥介质中迅速蒸发溶剂形成干粉的过程，该技术制得的微粉 粒径均匀，但是该法需使用热空气，不适合用于干燥对温度不敏感的蛋白质和多肽药物。 喷雾冷冻干燥法将喷雾干燥中的雾化步骤与冷冻干燥相结合，步骤是将雾化的药物水溶 液喷入液氮中，以冷冻干燥的步骤将其干燥，得到粒径均匀的药物微粉。该方法批处理 量大，但成本较高，得到的微粉粒径较大。超临界流体技术是新近发展的技术，可用于 超临界流体的性质来提取溶剂，干燥蛋白，但是，该技术仍存在许多需要研究和解决的 问题：如蛋白和多肽类药物在有机溶剂中的溶解度普遍较小，如何通过改变溶剂组成来 增加药物的溶解度，以及不同的操作条件与最终得到的不同性质微粉之间的关系。

发明内容