[发明专利]含微粉化重组人血管内皮抑制素缓释微球的制备方法

权利要求书

1.含重组人血管内皮抑制素微粉缓释微球的制备方法，其特征在于：

（1）将乳酸-羟基乙酸共聚物溶解于有机溶剂中得到内油相，所述的有机溶剂为二氯甲烷、乙腈、丙酮、乙酸乙酯的一种或多种，所述乳酸-羟基乙酸共聚物在有机溶剂中的浓度为10～500mg/ml；

（2）再将重组人血管内皮抑制素微粉加入内油相，所述重组人血管内皮抑制素微粉中含重组人血管内皮抑制素10%至95%（重量比），所述重组人血管内皮抑制素微粉的制备包含以下步骤：

①在含有重组人血管内皮抑制素的缓冲盐溶液中加入可溶性金属盐，然后调整该溶液的PH至蛋白的等电点，得到蛋白的细小颗粒沉淀，蛋白溶液变为混悬液；

②将混悬液与冻干保护剂混合均匀后，冻干；

③将冻干后的固体粉块用溶剂洗涤，除去冻干保护剂，得重组人血管内皮抑制素微粉；

（3)以每分钟4000-50000转高速分散重组人血管内皮抑制素微粉及内油相，得到固液混悬液；

（4）将所得混悬液置于盛有含乳化剂的植物油或矿物油的搅拌容器中，在0～60℃和每分钟100～2000转的速度搅拌形成油包油包固型复乳，所述的植物油为大豆油、玉米油、棉籽油、花生油、茶油的一种或多种，所述的矿物油为液体石蜡或者二甲基硅油，所述植物油的乳化剂为卵磷脂、蔗糖酯的一种或多种，加入量为植物油的0.1%～10%（w/v）,所述矿物油的乳化剂为司盘-80、司盘-60、蔗糖酯的一种或多种，加入量为矿物油的0.1%～10%（w/v）；

（5）持续搅拌挥发内油相中的混合有机溶剂，待微球固化后用微孔滤膜过滤分离，用溶剂洗涤微球表面残留的植物油或矿物油，真空干燥后得到微球成品，所述的洗涤微球的溶剂为正己烷、环己烷、正庚烷、石油醚的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述重组人血管内皮抑制素为重组人血管内皮抑制素Endostar。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述乳酸-羟基乙酸共聚物的分子量大小为5000～150000，其单体组成比例乳酸：羟基乙酸为99:1～50:50。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述共聚物为乳酸-羟基乙酸共聚物，乳酸-羟基乙酸分子量大小为5000～80000，其单体组成比例乳酸：羟基乙酸为85:15～50:50。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述有机溶剂为二氯甲烷、乙腈的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（2）中所述混悬液和冻干保护剂的体积比为1:99～99:1；混悬液中重组人血管内皮抑制素蛋白浓度为0.01mg/ml～500mg/ml。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于步骤（2）中所述混悬液和冻干保护剂的体积比为15:85～90:10。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（2）中所述冻干保护剂为聚乙二醇，分子量为1000～8000Da，冻干保护剂的浓度为1%～50%（w/v）。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（4）中所述含乳化剂的植物油为含卵磷脂和蔗糖酯的大豆油；所述含乳化剂矿物油为含司盘-80的药用轻质液体石蜡。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（5）所述洗涤微球的溶剂为石油醚。

11.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述微球中重组人血管内皮抑制素微粉的含量为5%至40%（重量比）。