[发明专利]一种基因免疫方法

权利要求书

1、一种基因免疫方法，其特征在是：以常规方法克隆目标基因cDNA，然后构建含目标抗原cDNA的真核表达载体重组质粒，以转座酶质粒作为免疫佐剂；将真核表达载体重组质粒和转座酶质粒按4∶1混匀，然后用基因包裹剂PEI按PEI∶质粒＝2∶1包裹，按每克体重注射1微克质粒的剂量进行动物免疫。

2、如权利要求1所说的基因免疫方法，其特征在于，其中PEI的使用浓度为10毫克/毫升。

3、如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述动物为家兔。

4、如权利要求3所述的方法，其特征在于：采用后肢内侧肌肉多点注射方法.

5、如权利要求4所述的方法，其特征在于，具体步骤为：

(1)克隆目标基因cDNA：以常规方法制备含目标基因RNA的总RNA，反转录成为第一链cDNA，进行聚合酶链反应扩增，扩增出的目的片段，然后克隆入TA载体，并进行测序鉴定；

(2)真核表达载体构建：将目标cDNA亚克隆入改造过的pcDNA3.0载体，或其它含CMV启动子的真核表达载体；

(3)免疫程序：用按常规碱裂解法大规模提取睡美人转座酶质粒和所构建的重组质粒，纯化后HBS溶解，得到2μg/uL的溶液，将已经制备的重组质粒和转座酶质粒按4∶1混匀，用基因包裹剂PEI按PEI∶质粒＝2∶1包裹后，37℃温育10分钟备用；

取家兔，以上混合物多点注射后肢内侧肌肉，每两周注射一次，注射剂量为每克体重注射重组质粒1μg，PEI与转座酶质粒按比例混合，共注射三次，在第18周加强免疫一次。

6、根据权利要求5所说的基因免疫方法，其特征在于，其中所说的TA载体，是pMD19-T或pGEM-T。

7、根据权利要求5所说的基因免疫方法，其特征在于，改造过的pcDNA3.0载体，是用PvuII切除了其中的neo基因及其表达调控序列。