[发明专利]一种多亚基蛋白的复性方法

说明书

技术领域

本发明属于生物化学与分子生物学技术领域，特别涉及一种多亚基蛋白的复 性方法。

背景技术

变性蛋白的复性技术是现代生命科学领域经常使用的一种实验技术，是指变 性蛋白质在变性剂如盐酸或尿素去除或浓度降低后，就会自发地从变性的热不稳 定状态向热力学稳定状态转变，从而形成具有生物学功能的天然结构。目前常用 的复性方法可以分为两类：稀释/透析复性法和色谱复性法。稀释/透析复性法是 目前最简单也是最常采用的复性方法，包括稀释复性法和透析复性法。稀释复性 法是将变性蛋白质溶液直接加入到复性缓冲液中进行复性的一种方法，操作简 单，缺点是蛋白复性时必须保持在较低的浓度(一般为10-100μg/mL)，复性反 应的体积较大，需要昂贵的复性添加剂并且必须保证质量要高，废水处理也相当 昂贵。透析复性法是将蛋白质加入到透析装置中，通过透析的过程将变性剂浓度 降低，从而使变性的蛋白质恢复到天然的状态，其操作相对简单，蛋白浓度也较 高，但其缺点是复性所需时间较长，需要大量的透析液，且蛋白质浓度较高而易 导致蛋白质的聚集沉淀。总体来说，稀释/透析复性法中蛋白质的复性率较低，且 费时，复性结束后需对复性蛋白质进行进一步的纯化。色谱复性法是一种色谱柱 辅助的在柱复性方法，其复性过程与蛋白质的纯化过程相似，将变性蛋白质吸附 在色谱柱上，然后梯度降低变性剂的浓度而使蛋白复性，或是利用蛋白质分子与 变性剂在凝胶柱介质中具有不同的迁移速率而使两者分离，从而使蛋白质复性。 色谱复性中常用的色谱有尺寸排阻色谱、离子交换色谱、疏水相互作用色谱和亲 和色谱。与传统的稀释或透析法相比，色谱复性法的优点是：1)在进样后可很 快脱除变性剂，操作效率高；2)减少了变性蛋白在脱除变性剂后形成聚集体， 提高了蛋白质复性的质量回收率和活性回收率，同时提高了蛋白质复性的初始浓 度；3)在复性的同时可以使目的蛋白与杂蛋白分离；4)便于回收变性剂，降低 了废水处理的成本。但是现有的色谱复性技术仅限于一条完整肽链的单亚基蛋白 的复性，对于两个或两个以上亚基组成的蛋白如主要组织相容性复合体没有合适 的色谱复性方法。

发明内容

技术问题：本发明针对上述问题提供一种省时高效的适用于两个或两个以上 亚基组成蛋白复性的多亚基蛋白的复性方法。

技术方案：本发明的多亚基蛋白的复性方法为：对由两个或两个以上亚基组 成的蛋白按如下步骤进行复性：先通过基因工程技术将各亚基分别在表达性宿主 菌中以包涵体形式表达，收获包涵体蛋白；再通过稀释/透析复性法对其中一个 或多个蛋白亚基进行预复性；然后进行多亚基蛋白的色谱复性，方法是首先将未 进行预复性的另一个或其余多个蛋白亚基结合在色谱柱上，然后将含有预复性蛋 白亚基的复性液上柱，并梯度性地增加已预复性蛋白亚基的浓度，使结合在色谱 柱上的蛋白亚基在复性的同时并与已预复性的蛋白亚基结合而折叠成完整的蛋白 质分子，最后经过洗涤后将复性后的蛋白从色谱柱上洗脱下来。

多亚基蛋白的色谱复性之前对其一个或多个蛋白亚基预复性的方法为稀释/ 透析复性法或色谱复性法。

多亚基蛋白的色谱复性时所采用的色谱柱为离子交换色谱柱、疏水相互作用 色谱柱或亲和色谱柱。

多亚基蛋白的一个或多个蛋白亚基预复性方法中的色谱复性法所采用的稀释 /透析复性法为稀释复性法或透析复性法。

多亚基蛋白的一个或多个蛋白亚基预复性方法中的色谱复性法所采用的色谱 柱为离子交换色谱柱、疏水相互作用色谱柱、亲和色谱柱或尺寸排阻色谱柱。

有益效果：本发明的有益效果如下：

(1)应用此复性方法可以对多个亚基组成的蛋白进行色谱法复性；

(2)蛋白复性率和产量均较高；

(3)由于复性和分离同时进行，所以所得复性后的蛋白不需纯化，简化了操 作过程；

(4)与稀释或透析复性法相比，此复性方法节省原料，省时省力。

附图说明

图1蛋白复性方法复性MHC/HBc_18-27复合体原理示意图。

图中1.变性的HBc_18-27-β2微球蛋白，2.稀释法预复性，3.预复性的HBc_18-27- β2微球蛋白，4.变性的MHC I重链蛋白，5.阴离子交换色谱柱介质，6.复性后的 MHC/HBc_18-27复合体。

具体实施方式