[发明专利]基于靶蛋白亲和选择的活性成分高通量筛选方法

权利要求书

1.一种基于靶蛋白亲和选择的活性成分高通量筛选方法，包括：筛选活性化合物，将筛选到 的活性化合物导入高效液相-质谱系统进行分析，进行化合物结构确证，并对其进行定量分 析，计算这些活性成分对于靶蛋白的结合率，评价其活性，其特征是筛选活性化合物包括如 下步骤：

a、将靶蛋白与待测化合物在缓冲液中共孵育，孵育溶液上样于分子排阻色谱柱或在线固 相提取柱，用缓冲液洗脱柱子，洗脱液流经紫外检测器，在吸收波长280nm下检测并收集首 先出峰的洗脱液；

b、将洗脱液与解离液混合进行解离，解离溶液上样于在线固相提取柱，靶蛋白和缓冲盐 流出柱子，而活性成分保留在在线固相提取柱上；

c、洗脱b步骤得到的保留活性成分的在线固相提取柱，洗脱液进入高效液相-质谱系统 进行分析；

其中缓冲液选自pH6.0～8.0的磷酸盐缓冲液、pH6.0～8.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液、 pH6.0～8.0乙酸铵缓冲液或pH6.0～8.0碳酸氢铵缓冲液；

孵育缓冲液中还含有增溶剂，所述增溶剂选自吐温、二甲基亚砜、聚乙二醇、曲拉通、 甲醇、乙醇中的一种或几种。

2.权利要求1的高通量筛选方法，还包括用质谱方法对筛选到的活性成分进行活性评价。

3.权利要求1的高通量筛选方法，其中待测化合物是单体化合物、由单体化合物组成的化合 物群或含有未知成分的中药提取物。

4.权利要求1的高通量筛选方法，其中分子排阻色谱柱填料选自Sephadex G-25、Sephadex G-50或Sephadex LH-20，洗脱流速0.3-0.5ml/min。

5.权利要求1的高通量筛选方法，其中在线固相提取柱选自Oasis MCX在线色谱柱、Oasis WCX在线色谱柱、Oasis MAX在线色谱柱、Oasis WAX在线色谱柱或Oasis HLB在线色谱柱。

6.权利要求1的高通量筛选方法，其中在线固相提取柱洗脱流速是2-4ml/min。

7.权利要求1的高通量筛选方法，其中解离液是酸水溶液或酸水溶液与有机试剂的混合溶液， 所述酸水溶液选自三氟乙酸、甲酸、乙酸或盐酸，pH为1-3；所述有机试剂选自甲醇或乙腈。