[发明专利]一种利用真菌诱导子提高灵芝酸含量的灵芝菌丝体液体发酵方法

权利要求书

1、一种利用真菌诱导子提高灵芝酸含量的灵芝菌丝体液体发酵方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)真菌诱导子的制备：

①真菌诱导子菌株的培养：将真菌诱导子菌种接种于PDA斜面培养基上活化后，转接到PDA平板培养基上，25～30℃培养3～5天，取菌块接种于装有PDA液体培养基的三角瓶中，于25～30℃、100～180r/min摇床中培养5～7天后，过滤得到菌丝体备用；

②真菌诱导子制备：将真菌诱导子菌丝体于60～70℃下烘干，研磨破碎，按重量体积比1∶2～1∶5的比例加入浓度为65～85％乙醇，在室温下浸泡10～15小时，减压抽滤，收集滤渣，滤渣按重量体积比1∶2～1∶5的比例加入氯仿和正丁醇的混合液，氯仿与正丁醇的体积比为3∶1～5∶1，洗滤渣3～5次，然后滤渣按重量体积比1∶3～1∶5的比例用丙酮冲洗后，滤渣按重量体积比1∶3～1∶5的比例再用水冲洗，自然风干，干物质按重量体积比1∶5～1∶7的比例加入浓度为5～15％三氟乙酸，沸水浴酸解0.5～2小时，水解物过滤，取滤液，用NaOH中和至pH为4～7，在3℃～8℃下静置10～15小时，过滤除菌，制成真菌诱导子，冷冻保存；

(2)灵芝的液体发酵培养：

将斜面保藏的灵芝菌种接种到PDA平板培养基上，进行活化培养，培养温度25～30℃，培养时间5～10天，然后取菌块接种于装有液体发酵培养基的中三角瓶进行发酵培养，摇床转速100～180r/min，温度25～30℃，时间5～8天；

液体发酵培养基组成：葡萄糖20～50g/L、酵母膏2～8g/L、蛋白胨2～8g/L、磷酸二氢钾0.5～2.0g/L、硫酸镁0.1～1.0g/L、维生素B10.01～0.10g/L，余量为蒸馏水；

(3)灵芝与真菌诱导子共培养：

在灵芝液体发酵培养第1～5天，加入真菌诱导子，使真菌诱导子浓度达到40～120μg/mL，然后继续培养2～7天，得到灵芝菌丝体。

2、根据权利要求1所述的一种利用真菌诱导子提高灵芝酸含量的灵芝菌丝体液体发酵方法，其特征在于所述的真菌诱导子菌种为枝顶孢属真菌顶头孢(Acremonium strictum)，菌种编号CGMCCNo.3.2058；或木霉属真菌木素木霉(Trichoderma viride)，菌种编号为CGMCC No.3.2196；或轮枝菌属真菌蘑菇轮枝孢(Verticilliumpsalliotae)，菌种编号为CGMCC No.3.4423。

3、根据权利要求1所述的一种利用真菌诱导子提高灵芝酸含量的灵芝菌丝体液体发酵方法，其特征在于所述的发酵用灵芝菌种为普通栽培品种(Ganoderma lucidum)，购自中国普通微生物菌种保藏中心，编号为CGMCC No.5.644。

4、根据权利要求1所述的一种利用真菌诱导子提高灵芝酸含量的灵芝菌丝体液体发酵方法，其特征在于所述的真菌诱导子菌株的培养步骤中取直径0.3～0.6cm的菌块3～5块，接种于PDA液体培养基中，每500mL三角瓶装PDA液体培养基100～200mL。

5、根据权利要求1所述的一种利用真菌诱导子提高灵芝酸含量的灵芝菌丝体液体发酵方法，其特征在于所述的灵芝的液体发酵培养步骤中取直径0.3～0.6cm的菌块3～5块，接种于液体发酵培养基中，每500mL三角瓶装PDA液体培养基100～200mL。

6、根据权利要求1所述的一种利用真菌诱导子提高灵芝酸含量的灵芝菌丝体液体发酵方法，其特征在于所述的灵芝与真菌诱导子共培养步骤中真菌诱导子加入浓度为80μg/mL。

7、根据权利要求1所述的一种利用真菌诱导子提高灵芝酸含量的灵芝菌丝体液体发酵方法，其特征在于所述的灵芝与真菌诱导子共培养步骤中真菌诱导子于灵芝发酵培养的第1天加入，然后与灵芝共同培养。

8、根据权利要求1所述的一种利用真菌诱导子提高灵芝酸含量的灵芝菌丝体液体发酵方法，其特征在于所述的灵芝与真菌诱导子共培养步骤中真菌诱导子于灵芝发酵培养的第3天加入，然后与灵芝共同培养。

9、根据权利要求1所述的一种利用真菌诱导子提高灵芝酸含量的灵芝菌丝体液体发酵方法，其特征在于所述的灵芝与真菌诱导子共培养步骤中真菌诱导子于灵芝发酵培养的第5天加入，然后与灵芝共同培养。