[发明专利]一种简便的转基因大豆检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种简便的转基因大豆检测试剂盒，包括引物、缓冲液、dNTPs、 DNA聚合酶和对照，其特征在于：包括LAMP反应缓冲液2.5μl，内引物FIP 和BIP各2μl、外侧引物F3和B3各0.3μl，甜菜碱1.0μl，MgSO4溶液2.5ul， 荧光染料I 2.5μl；其中内引物FIP和BIP分别为FIP： CGGAAAGGCCAGAGGATTTGCGTTTTCTACAGCCTGCATGCTTCAC和BIP： CGATCTCCCACCGGTCCTTCATTTTCGTCCTCGCCTTCCAGAA；外侧引物F3和B3分别 为F3：CCTTTAGGATTTCAGCATCAGTG和B3：CATGGCCTTGCCCGTATT。

2.按权利要求1简便的转基因大豆检测试剂盒，其特征在于：所述 dNTPs各2μl，纯水12.7μl，DNA聚合酶1.0μl，对照1μl；所述荧光染 料I为SYBR GREEN荧光染料，DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶，对照为转基 因大豆阳性对照DNA溶液。

3.按权利要求1简便的转基因大豆检测试剂盒，其特征在于：所述LAMP 反应缓冲液每升中含有20mmol Tris-HCI，10mmol KCI，10mmol(NH₄)₂SO₄， 2mmolMgSO₄和质量体积比0.1％的Triton X-100。

4.一种使用权利要求1所述的简便的转基因大豆检测试剂盒的检测方 法，其特征在于将待测转基因大DNA模板1μl混合在LAMP反应缓冲液 2.5μl，内引物FIP和BIP各2μl、外侧引物F3和B3各0.3μl、甜菜碱1.0μl、 dNTPs各2μl、纯水12.7μl和MgSO4溶液2.5ul中于95-98℃加热5-10min， 然后迅速置于冰浴中，2000-5000rpm离心10-20s后，加入DNA聚合酶 1.0μl在于65℃保温45-60min，最后在80-85℃加热10-15min终止反应， 反应物经过电泳检测显示特征性条带，证明所检测的原料中含有转基因大 豆；

其中内引物FIP和BIP分别为FIP： CGGAAAGGCCAGAGGATTTGCGTTTTCTACAGCCTGCATGCTTCAC和BIP： CGATCTCCCACCGGTCCTTCATTTTCGTCCTCGCCTTCCAGAA；外侧引物F3和B3分别 为F3：CCTTTAGGATTTCAGCATCAGTG和B3：CATGGCCTTGCCCGTATT；所述DNA 聚合酶为Bst DNA聚合酶。

5.按权利要求4所述的使用简便的转基因大豆检测试剂盒的检测方法， 其特征在于：将上述经过电泳检测显示特征性条带加入荧光染料SYBR GREEN I 2.5μl后若反应液显示绿色荧光颜色变化，证明所检测的原料中含有转 基因大豆。

6.按权利要求4所述的使用简便的转基因大豆检测试剂盒的检测方法， 其特征在于：所述LAMP反应缓冲液每升中含有20mmol Tris-HCI，10mmol KCI， 10mmol(NH₄)₂SO₄，2mmolMgSO₄和质量体积比0.1％的Triton X-100。