[发明专利]一种简便的转基因大豆检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学，具体的说是一种简便的转基因大豆检测试剂 盒及检测方法。

背景技术

转基因作物是指利用重组DNA技术将外源基因整合于受体植物基因 组、改变其遗传组成后产生的植物及其后代，也称为遗传修饰生物体 (Genetically modified organisms，GMOs)。自1983年首例转基因植物 问世以来，全球转基因作物的种植面积和销售收入均以倍数增长。但从严 肃的科学意义上说，转基因农产品的生物安全性目前尚无确定的结论。虽 然我国规定自2002年3月20日起，所有转基因农作物及其副产品都应加 以标志，但是在进口转基因大豆数量超出国产大豆的形势下，仍然很少见 到加注转基因字样的农产品。因此开发简便的转基因大豆检测技术并对相 关产品进行检测势在必行。

目前普遍应用基于DNA的检测技术对转基因作物进行检测。该类技术 主要包括传统定性PCR和定量PCR。这些检测技术都需要特殊的DNA扩增仪 (PCR仪)才能够完成。而环介导的等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification，LAMP)依赖于能够识别靶序列上6个特异区 域的引物和一种具有链置换特性的DNA聚合酶，在等温条件下可高效、快 速、高特异地扩增靶序列，因此不需要PCR仪。由此建立基于LAMP扩增技 术的转基因大豆检测方法并开发了相应的检测试剂盒，具有广阔的应用前 景。

发明内容

本发明目的在于提供一种简便的转基因大豆检测试剂盒及检测方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

转基因大豆检测试剂盒：包括LAMP反应缓冲液2.5μl，内引物FIP(浓 度为10μmol/L)和BIP(浓度为10μmol/L)各2μl、外侧引物F3(浓度为 10μmol/L)和B3(浓度为10μmol/L)各0.3μl、甜菜碱(浓度为 5mol/L)1.0μl、dNTPs(浓度为10mmol/L)各2μl、纯水12.7μl，MgSO4溶 液(浓度为20mmol/L)2.5ul；Bst DNA聚合酶(浓度为8U/uL)1.0μl，转基因 大豆阳性对照DNA溶液(浓度为3μg/μl)1μl，荧光染料SYBR GREEN I (100×电泳用染料)2.5μl；其中内引物FIP和BIP分别为FIP： CGGAAAGGCCAGAGGATTTGCGTTTTCTACAGCCTGCATGCTTCAC和BIP： CGATCTCCCACCGGTCCTTCATTTTCGTCCTCGCCTTCCAGAA；外侧引物F3和B3分别 为F3：CCTTTAGGATTTCAGCATCAGTG和B3：CATGGCCTTGCCCGTATT。

所述每升LAMP检测反应缓冲液中含有20mmol Tris-HCI，10mmol KCI， 10mmol(NH₄)₂SO₄，2mmol MgSO₄和质量体积比0.1％的Triton X-100。

转基因大豆检测方法：将待测转基因大豆DNA模板1μl混合在LAMP反 应缓冲液2.5μl，内引物FIP(浓度为10μmol/L)和BIP(浓度为10μmol/L) 各2μl、外侧引物F3(浓度为10μmol/L)和B3(浓度为10μmol/L)各0.3μl、 甜菜碱(浓度为5mol/L)1.0μl、dNTPs(浓度为10mmol/L)各2μl、纯水 12.7μl和MgSO4溶液(浓度为20mmol/L)2.5ul中于95-98℃加热5-10min， 然后迅速置于冰浴中，离心混合后，加入Bst DNA聚合酶(浓度为 8U/uL)1.0μl在于65℃保温45-60min，最后在80-85℃加热10-15min终 止反应，反应物经过电泳检测显示特征性条带，证明所检测的原料中含有 转基因大豆；其中内引物FIP和BIP分别为FIP： CGGAAAGGCCAGAGGATTTGCGTTTTCTACAGCCTGCATGCTTCAC和BIP： CGATCTCCCACCGGTCCTTCATTTTCGTCCTCGCCTTCCAGAA；外侧引物F3和B3分别 为F3：CCTTTAGGATTTCAGCATCAGTG和B3：CATGGCCTTGCCCGTATT。