[发明专利]一种用于海水双壳类减数分裂器的免疫荧光显微观察方法

权利要求书

1.一种用于海水双壳类减数分裂器的免疫荧光显微观察方法，将样品经固定等预处理、染色、制片后即可观察，其特征在于：将样品采用质量百分比浓度2-6％多聚甲醛的磷酸缓冲液(PBS)固定，再依次进行透化和封闭处理，而后对样品纺锤体进行免疫荧光染色而后用含5-20mg/L碘化丙锭的磷酸缓冲液对染色体进行荧光染色；染色后将样品制片即可在荧光显微下观察。

2.按权利要求1所述的用于海水双壳类减数分裂器的免疫荧光显微观察方法，其特征在于：将样品经固定液固定30-60min，转入孵育液中透化30-60min，采用封闭液处理30-60min；所述孵育液为体积百分比浓度0.5-1％的聚乙二醇辛基苯基醚的PBS；所述封闭液为1-5％小牛血清白蛋白的PBS。

3.按权利要求1所述的用于海水双壳类减数分裂器的免疫荧光显微观察方法，其特征在于：样品的染色依次采用免疫荧光染色剂对纺锤体处理40-60min和荧光染色剂对染色体处理10min，采用PBS处理5-20min，所述免疫荧光染色剂是由异硫氰酸荧光素偶联的抗α微管蛋白抗体与PBS按体积比1∶1000-5000配制。

4.按权利要求1、2或3所述的用于海水双壳类减数分裂器的免疫荧光显微观察方法，其特征在于：所述PBS缓冲溶液浓度为0.2mol/L，pH7.4。

5.按权利要求1所述的用于海水双壳类减数分裂器的免疫荧光显微观察方法，其特征在于：染色后样品转移到载玻片，加入防荧光淬灭剂，封片，制成观察制片，在-20℃避光条件下可保存2周；所述防荧光淬灭剂为体积百分比浓度1-4％DABCO的甘油溶液。

6.按权利要求1所述的用于海水双壳类减数分裂器的免疫荧光显微观察方法，其特征在于：制片置于荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜下，以高压汞灯产生的紫外光为激发光，采用FITC对应的滤光片，观察分辨纺锤体和染色体的形态、位置和数量。

7.按权利要求1所述的用于海水双壳类减数分裂器的免疫荧光显微观察方法，其特征在于：所述样品包括各种海水双壳类的未受精卵及受精卵。