[发明专利]一种用有核红细胞进行唐氏综合症产前基因筛查的方法和试剂盒

权利要求书

1、一种用有核红细胞进行唐氏综合症产前基因筛查的方法，其特征是，它包括下列步骤(a)胎儿核红细胞NRBC的分离纯化和DNA提取；(b)用21号染色体特异序列DSCR区段序列和16号染色体上的GAPDH基因序列分别合成引物和双色Taqman荧光探针；(c)在扩增缓冲反应体系中，双色荧光定量PCR反应，实现两对引物的共扩增，测得荧光定量PCR的曲线。

2、按照权利要求1所述的方法，其特征是，其中的步骤(a)为：取适量孕期在10-18周的孕妇外周静脉血，EDTA抗凝，采用不连续密度梯度离心方法离心，分离提取1.070g/ml至1.090g/ml密度区间的外周血有核细胞组分，再用抗CD71抗体磁珠正筛选，磷酸缓冲盐溶液(PBS)充分洗涤，获得胎儿NRBC；去净PBS后，加入适量超纯水，98℃下裂解细胞5min，释放DNA，置-20℃冰箱保存备用。

3、按照权利要求2所述的方法，其特征是，所述的步骤(a)，其中的孕期在10-14周的孕妇外周静脉血取量为2ml，孕期在14-18周的孕妇外周静脉血取量为5ml。

4、按照权利要求1所述的方法，其特征是，其中的步骤(c)为：反应体系在多色荧光定量热循环仪上进行94℃预变性2min；94℃变性10sec，52-58℃复性30sec，60℃延伸40sec，共45个循环，并在60℃延伸时检测荧光强度，使两对引物分别同时引导新链合成，实现两对引物的共扩增。

5、一种用有核红细胞进行唐氏综合症产前基因筛查的试剂盒，其特征是，它包括有核红细胞分离纯化的试剂，根据21号染色体特异序列DSCR区段序列和16号染色体上的GAPDH基因序列合成的引物和双色Taqman荧光探针，还包括用于进行PCR反应的扩增缓冲反应试剂。

6、按照权利要求5所述的试剂盒，其特征是，其中用21号染色体特异序列DSCR区段序列和16号染色体上的GAPDH基因序列合成的引物和双色Taqman荧光探针，其序列分别为：

DSCR上游引物：5’-CAG AAA TCC CAG TTC ATG TTG CT-3’；

DSCR下游引物：5’-CAT TCC CGG GTG CCA TGA ACA GT-3’；

DSCR TaqMan探针：

5’-[FAM]CAAGGCCGTGTCCCCTTGTTC[TAMRA]-3’；

GAPDH上游引物：5’-ctc cct ctt tct ttg cag caa t-3’；

GAPDH下游引物：5’-cag ctc tca tac cat gag tcc t-3’；

GAPDHTaqMan探针：5’-[HEX]ctg cac cac caa ctg ctt agc[TAMRA]-3’。

7、按照权利要求5所述的试剂盒，其特征是，其中进行PCR反应的扩增缓冲反应试剂包括耐热DNA聚合酶、dNTPs、模板DNA、镁离子、PCR缓冲液和超纯水。

8、按照权利要求5所述的试剂盒，其特征是，其中成分的浓度含量为：DSCR的引物10pmol/50ul、GAPDH的引物10pmol/50ul、双色荧光Taqman探针0.1-0.5umol/L、Taq DNA聚合酶1-3U/50ul、dNTPs底物0.1-0.5mmol、模板DNA若干、镁离子1.5-3.5mmol/L、缓冲液0.5-1.5XPCR。

9、按照权利要求8所述的试剂盒，其特征是，其中1XPCR缓冲液包括50mmol/L KCl、10mmol/L Tris.HCl PH8.3、0.01％明胶。