[发明专利]一种饲料有效磷测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及到饲料磷生物学效价的测定方法，特别是猪植物性饲料有效磷的测定方法。

背景技术

磷是动植物体内的必需矿物元素，它不但是骨骼组织的有效成分，而且是其它软组织和能量代谢过程中必不可少的成分，对代谢功能的正常发挥起着重要的作用。因此，动物必须从饲料中获取足够的磷，才能维持正常的生命和生产活动。特别是现代高产品种对磷营养十分敏感，若磷缺乏，即可导致动物生长缓慢甚至停滞，饲料转化率降低。与此同时，作为一种非再生资源，磷在饲料工业中具有举足轻重的地位，是继蛋白质和能量以外的第三种最昂贵的饲料原料(Lei等，2000；Novak等，2000；Fan等，2001；霍启光，2002)。据统计，我国配合饲料生产量达7400万吨(国家统计年鉴，2001)，按磷酸氢钙添加量1.2％计，则年消耗量近90万吨，所占原料费用达13.5亿元。，但与其形成鲜明对比的是，在养殖业发达的地区，磷污染环境是个非常严重的问题，已成为一个全球性的问题(Jongbloed等，1997；Oliglive等，2000；Paik等，2001；Han等，2001；方热军等，2003)。例如，在欧洲一些地区(比利时、荷兰和法国)动物排泄物所导致的P₂O₅量达300kg/ha/年(Eeckhout等，1994)；在我国，以养猪业为例，年生猪饲养量达4.47亿头，年猪粪尿排放量达1.96亿吨，按排泄物中含磷2.0％计(Poulsen等，1999)，仅养猪业一项，年向环境排放的磷量就达196万吨之多。因此，磷资源的合理、有效利用对解决因过量磷的排泄所导致的环境污染具有重要意义。

植物性饲料中的磷由植酸磷和非植酸磷组成，是满足动物磷营养需要的重要来源。不同植物性饲料植酸磷含量差异很大，植酸酶活力程度不一。因此，猪对不同植物性饲料磷的消化吸收有很大差别(Nelson等，1967，1968；中国资料数据库，1991)，由于尚缺乏有效的方法，目前我国植物性饲料磷营养价值的评定仍停留在估测水平(郑树贵等，2001)。生产上为了避免磷营养的缺乏，往往向饲料中添加大量的无机磷盐，既增加了饲料成本，又导致过量磷的排泄。

有效磷评定的传统方法主要是采用斜率比法，通过测定被考察磷源相对于标准磷酸盐差异而确定的其相对生物学效价，或者直接测定磷的表观消化率(Jongbloed等，1987，1990；Dellaert等，1990；Cromwell，1992；贾刚等，1998；NRC，1998；Fan等，2001)。由于受到方法的限制和内源磷的干扰，二者均难以反映饲料磷被动物吸收利用的真实情况(Fan等，2002)。

理论上，磷的真消化率更能准确反映饲料中磷源被动物利用的真实情况，但是内源磷的准确评定方法复杂，试验条件难以控制。而且动物试验虽然客观，但耗时、耗财、费力。

体外透析法通过人工模拟动物的消化过程，其结果基本上可以反映饲料养分被动物消化吸收的情况，在蛋白质生物学效价评定中被广泛应用(Wicke，1972；Gueguen，1977；Huyhebaert等，1980)。Liu等(1997，1998)报道，体外法评定饲料有效磷含量的结果与体内法高度相关(r＝0.999)，目前体外透析法已被用于饲料磷生物学效价的评定，且其与饲料磷真消化率的相关系数达到0.899(方热军等，2003)，但透析袋毕竟不是活体组织，无法反映饲料磷在动物体内真实的吸收情况(计峰等，2003)。而外翻肠囊法就可以克服这一缺点，但是根据查阅资料来看，外翻肠囊法尚未用于饲料磷生物学效价的评定。因此，本发明拟采用体内消化试验、体外透析法及外翻肠囊法分别测定饲料磷消化率、体外透析率及体外吸收率，分别将饲料磷体外透析率、体外吸收率与饲料磷消化率进行比较分析，进而进行线性回归分析，比较何种体外评定方法更接近体内评定方法，探索更适合于饲料磷生物学效价的体外评定方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种适合饲料有效磷测定的新方法-外翻肠囊法，克服现有技术测定饲料有效磷的不足。

本发明的理论依据：具有生理活性的猪十二指肠离体后短时间内其细胞仍具有生理活性，可以进行物质的渗透与交换。

本发明的目的是通过下述技术方案实现的：

本发明提供一种饲料有效磷的测定方法，包括步骤如下：

(1)胃蛋白酶消化。准确称取待测饲料样品，放入玻璃试管中，加入适量胃蛋白酶溶液振荡摇匀，用palafilm胶密封，在39℃的水浴中恒温培养75min。